前言

在腫瘤免疫治療領(lǐng)域，靶向程序性細(xì)胞死亡受體1（PD-1）/程序性死亡受體配體1（PD-L1）與靶向細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)蛋白-4（CTLA-4）的免疫治療聯(lián)合或不聯(lián)合化療已被證實(shí)相較化療能夠提升抗腫瘤療效1-3，但患者的長期OS獲益仍有限，亟需探索新的治療模式。Volrustomig是新型PD-1/CTLA-4雙特異性抗體，將一個(gè)抗PD-1單鏈可變區(qū)片段（scFv）與一個(gè)抗CTLA-4 scFv整合于同一抗體骨架，旨在通過優(yōu)先結(jié)合于腫瘤微環(huán)境中已激活的PD-1+T細(xì)胞，從而在該細(xì)胞同步實(shí)現(xiàn)CTLA-4的高效阻斷4。2025年歐洲腫瘤內(nèi)科學(xué)會免疫腫瘤學(xué)大會（ESMO IO）于12月10日至12日在英國倫敦召開。本次大會上公布了兩項(xiàng)臨床前研究（摘要號：288P與412P）結(jié)果，進(jìn)一步揭示了Volrustomig的作用機(jī)制及臨床應(yīng)用潛力5,6，為該藥物的臨床開發(fā)提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)與理論支持。本文基于這兩項(xiàng)研究進(jìn)行深入解讀，以供讀者參考。

288P：Volrustomig驅(qū)動(dòng)強(qiáng)效的CTLA-4阻斷并誘導(dǎo)PD-1持續(xù)降解，增強(qiáng)體外T細(xì)胞功能

此前，在工程化細(xì)胞及超抗原刺激的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）的體外研究中觀察到，Volrustomig可通過結(jié)合PD-1錨定于T細(xì)胞表面，從而增強(qiáng)CTLA-4阻斷并可通過雙靶點(diǎn)共結(jié)合機(jī)制，誘導(dǎo)PD-1內(nèi)吞降解。為進(jìn)一步闡明Volrustomig的作用機(jī)制，研究人員繼續(xù)開展了系統(tǒng)的體外與離體實(shí)驗(yàn)5。

Volrustomig可提升體外腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TILs）干擾素γ（IFN-γ）的分泌水平

將胃癌來源的人腫瘤切片培養(yǎng)物（TSCs）以100nM的Volrustomig進(jìn)行72小時(shí)孵育，隨后通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELLA）檢測IFN-γ的分泌情況。同時(shí)，將非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）來源的解離腫瘤細(xì)胞（DTCs）與100nM抗CTLA-4抗體、100nM抗PD-1抗體或不同濃度Volrustomig共培養(yǎng)72小時(shí)后，通過電化學(xué)發(fā)光技術(shù)（MSD）檢測IFN-γ的分泌。結(jié)果表明，Volrustomig可增強(qiáng)NSCLC DTCs及胃癌來源TSCs的IFN?γ分泌（圖1）5。

圖1. Volrustomig可增強(qiáng)NSCLC DTCs及胃癌來源TSCs的IFN?γ分泌

Volrustomig可在體外與離體條件下持續(xù)誘導(dǎo)PD?1降解

在NSCLC DTCs的離體模型中，將腫瘤組織解離后，分別使用Volrustomig或抗PD-1抗體與抗CTLA-4抗體的聯(lián)合制劑處理72-96小時(shí)，隨后通過流式細(xì)胞術(shù)對調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs，CD4+/FOXP3+）、常規(guī)CD4+T細(xì)胞（CD4+/FOXP3-）以及CD8+T細(xì)胞進(jìn)行總PD-1蛋白的定量分析。結(jié)果顯示，Volrustomig處理可導(dǎo)致CD8+T細(xì)胞、常規(guī)CD4+T細(xì)胞及Tregs表面的PD-1蛋白表達(dá)呈現(xiàn)劑量依賴性下降（圖2），且該降解效應(yīng)在T細(xì)胞經(jīng)歷多輪抗原再刺激后依然得以維持（圖4）。相比之下，聯(lián)合制劑未觀察到顯著的PD-1降解現(xiàn)象。值得注意的是，PD-1降解程度在不同細(xì)胞亞群中存在差異，其強(qiáng)度依次為Tregs>常規(guī)CD4+T細(xì)胞 > CD8+T細(xì)胞（圖3）5。

圖2. Volrustomig可在體外誘導(dǎo)NSCLC腫瘤TILs發(fā)生劑量依賴性PD-1降解，而抗CTLA-4抗體和抗PD-1抗體聯(lián)合制劑則無此作用

圖3. PD-1降解程度在Tregs中最強(qiáng)>常規(guī)CD4+T細(xì)胞 > CD8+T細(xì)胞[直方圖展示了在10nM Volrustomig及聯(lián)合制劑處理下的PD-1表達(dá)水平；相鄰點(diǎn)圖顯示了來自4個(gè)樣本的平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（非配對t檢驗(yàn)）]

圖4. Volrustomig在體外和離體再刺激實(shí)驗(yàn)中可誘導(dǎo)PD-1的持續(xù)降解[示意圖描述了再刺激實(shí)驗(yàn)方案，并通過方差分析（ANOVA）評估了外周血單個(gè)核細(xì)胞（中圖）及基于樹突狀細(xì)胞（右圖）測定中的總PD-1表達(dá)水平]

Volrustomig在離體條件下優(yōu)先結(jié)合表達(dá)PD?1的TILs

研究人員還對NSCLC與結(jié)直腸癌（CRC）來源的DTCs進(jìn)行了AF488標(biāo)記的Volrustomig染色與免疫表型分析。進(jìn)一步的分析聚焦于CD4+與CD8+T細(xì)胞亞群，根據(jù)細(xì)胞表面PD-1與CTLA-4的共表達(dá)情況，將來自NSCLC與CRC DTCs的T細(xì)胞進(jìn)行細(xì)分。數(shù)據(jù)顯示，在TILs中，PD-1與CTLA-4雙陽性亞群所表達(dá)的PD-1水平高于僅表達(dá)PD-1的亞群，從而導(dǎo)致Volrustomig在該群體中的結(jié)合更強(qiáng)（圖5）。此外，Volrustomig在TILs上的結(jié)合強(qiáng)度與PD-1的表達(dá)水平顯著相關(guān)，而與CTLA-4的表達(dá)無關(guān)（圖6）5。

圖5. 與PD-1+CTLA-4-TILs相比，PD-1+ CTLA-4+TILs表達(dá)更高水平的PD-1，從而導(dǎo)致更高的Volrustomig結(jié)合[通過對PD-1與CTLA-4表面表達(dá)進(jìn)行設(shè)門，分選出NSCLC（紫色）和CRC（紅色）患者樹突狀細(xì)胞中的CD4+ T細(xì)胞與CD8+ T細(xì)胞，并繪制了PD-1及Volrustomig-AF488的平均熒光強(qiáng)度（MFI）（配對t檢驗(yàn)）]

圖6. Volrustomig在TILs上的結(jié)合與PD?1顯著相關(guān)，而與CTLA?4不相關(guān)[圖為CRC樣本的代表性流式圖，展示了PD-1、CTLA-4的表達(dá)與Volrustomig-AF488結(jié)合情況之間的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)基于6個(gè)樣本計(jì)算得出（Pearson相關(guān)系數(shù)）]

Volrustomig可協(xié)同結(jié)合TILs上的CTLA?4，與抗PD-1抗體與抗CTLA-4抗體的聯(lián)合制劑相比，可提供更高的CTLA?4受體占位率

受體占據(jù)分析表明，在NSCLC DTCs中，經(jīng)Volrustomig或抗PD-1與抗CTLA-4聯(lián)合制劑處理30分鐘后，采用熒光標(biāo)記的競爭性抗體檢測并利用流式細(xì)胞術(shù)定量測定Tregs、常規(guī)CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞表面的“游離”PD-1與CTLA-4水平。結(jié)果顯示，相較于抗PD-1抗體與抗CTLA-4抗體聯(lián)合制劑，Volrustomig在Tregs、CD4+及CD8+T細(xì)胞上均能實(shí)現(xiàn)更低的“游離”CTLA-4水平，展現(xiàn)出更優(yōu)的CTLA-4通路阻斷效能5。

圖7. Volrustomig與TILs上的CTLA-4協(xié)同結(jié)合[滴定曲線展示了一個(gè)代表性樣本的技術(shù)重復(fù)結(jié)果，IC50數(shù)據(jù)基于4個(gè)樣本得出（配對t檢驗(yàn)）]

以上發(fā)現(xiàn)共同說明，Volrustomig作為一種同時(shí)靶向PD-1與CTLA-4的雙特異性抗體，通過PD-1介導(dǎo)的錨定作用，優(yōu)先結(jié)合于TILs表面，而后協(xié)同結(jié)合CTLA-4。這一靶向特性不僅能夠誘導(dǎo)TILs上的PD-1發(fā)生降解，且與抗PD-1/抗CTLA-4單抗聯(lián)合療法相比，可誘導(dǎo)更強(qiáng)的CTLA-4阻斷效應(yīng)，為其臨床轉(zhuǎn)化提供了理論支撐。

412P：Volrustomig協(xié)同結(jié)合PD-1與CTLA-4，并在腫瘤抗原特異性T細(xì)胞中誘導(dǎo)PD-1降解

為在更貼近生理環(huán)境的腫瘤抗原特異性場景中驗(yàn)證Volrustomig的作用機(jī)制，本研究從健康供體PBMCs中誘導(dǎo)生成黑色素瘤相關(guān)抗原1（MART1）特異性T細(xì)胞，構(gòu)建腫瘤抗原特異性模型。利用熒光標(biāo)記的Volrustomig及競爭性抗CTLA-4抗體，通過流式細(xì)胞術(shù)分析了PD-1表達(dá)對其結(jié)合及CTLA-4阻斷功能的影響；采用Incucyte活細(xì)胞成像系統(tǒng)評估了抗原特異性殺傷效率，并輔以細(xì)胞因子檢測以全面評價(jià)T細(xì)胞功能變化；此外，通過蛋白質(zhì)印跡與流式細(xì)胞術(shù)從蛋白水平檢測了PD-1的降解情況6。

Volrustomig在抗原特異性T細(xì)胞上以PD?1為錨定，并協(xié)同結(jié)合CTLA?4

流式細(xì)胞術(shù)分析評估了Volrustomig與預(yù)阻斷PD-1或CTLA-4的MART1特異性擴(kuò)增T細(xì)胞的結(jié)合情況，結(jié)果顯示，當(dāng)PD-1被阻斷時(shí)，Volrustomig的結(jié)合減少，而CTLA-4的阻斷則對其結(jié)合無影響，表明Volrustomig主要通過錨定PD-1來發(fā)揮作用（圖8）6。

圖8. 流式細(xì)胞術(shù)評估Volrustomig與PD-1或 CTLA -4預(yù)阻斷的MART-1擴(kuò)增T細(xì)胞的結(jié)合情況[通過Dextramer染色法鑒定抗原特異性CD8+T細(xì)胞（CD8 DEX+），經(jīng)預(yù)阻斷的實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)以未阻斷T細(xì)胞為基準(zhǔn)進(jìn)行歸一化，并以倍數(shù)變化表示；樣本量N=4，采用配對單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)顯著性標(biāo)注如下：* P<0.05，** P<0.01，*** P<0.005]

進(jìn)一步的功能分析顯示，當(dāng)PD-1未被阻斷時(shí)，Volrustomig能更有效地阻斷表面CTLA-4的表達(dá)，強(qiáng)調(diào)了PD-1在Volrustomig介導(dǎo)的CTLA-4阻斷中的關(guān)鍵作用（圖9）6。

圖9. 流式細(xì)胞術(shù)評估Volrustomig對PD-1預(yù)阻斷或未阻斷的MART1擴(kuò)增T細(xì)胞中CTLA-4的阻斷作用[對4名健康供體的MART-1擴(kuò)增T細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理：一組使用a-PD-1抗體（綠色標(biāo)記），另一組不作處理（藍(lán)色標(biāo)記），并通過流式細(xì)胞術(shù)檢測Volrustomig介導(dǎo)的CTLA-4阻斷效果；采用Dextramer染色法鑒定抗原特異性CD8+T細(xì)胞（DEX）；CTLA-4表面減少百分比通過Volrustomig處理的MART-1擴(kuò)增T細(xì)胞計(jì)算得出。樣本量N=4，采用配對單因素方差分析，*p<0.05，**p<0.01]

Volrustomig與PD?1的結(jié)合對于增強(qiáng)抗原特異性殺傷活性至關(guān)重要

抗原特異性殺傷效率評估實(shí)驗(yàn)觀察到，預(yù)先阻斷PD-1會減弱Volrustomig對抗原特異性殺傷的增強(qiáng)作用，并降低IFN-γ和顆粒酶B的釋放，進(jìn)一步證實(shí)了PD-1在Volrustomig功能機(jī)制中的重要性（圖10）6。

圖10. Volrustomig阻斷PD-1對靶向殺傷及細(xì)胞因子釋放的功能增強(qiáng)作用分析[從4名健康供體獲取的MART-1擴(kuò)增T細(xì)胞，經(jīng)a-PD-1預(yù)先阻斷（綠色）或不做處理（藍(lán)色），隨后與自體單核細(xì)胞及表達(dá)MART-1-GFP的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)；通過Incucyte系統(tǒng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測GFP信號減弱以評估抗原特異性殺傷效應(yīng)，并收集上清液進(jìn)行細(xì)胞因子檢測；以未經(jīng)阻斷的T細(xì)胞為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，計(jì)算預(yù)處理組數(shù)據(jù)的倍數(shù)變化。實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)4次，采用配對單因素方差分析，* p<0.05]

與抗PD-1抗體及抗PD-1抗體與抗CTLA-4抗體聯(lián)合制劑相比，Volrustomig可通過在抗原特異性T細(xì)胞上協(xié)同結(jié)合PD?1與CTLA?4，誘導(dǎo)PD?1降解

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在抗原特異性模型體系中，與抗PD-1抗體及抗PD-1抗體與抗CTLA-4抗體聯(lián)合制劑相比，Volrustomig能夠協(xié)同結(jié)合T細(xì)胞上的PD-1與CTLA-4，并介導(dǎo)PD-1的降解，但不影響CTLA-4的表達(dá)。該結(jié)論已通過蛋白質(zhì)印跡（圖11）與流式細(xì)胞術(shù)（圖12）得到證實(shí)6。

圖11. 蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）評估Volrustomig介導(dǎo)的PD-1降解作用[將4名健康供體的MART-1擴(kuò)增T細(xì)胞與MART-1肽（5μg/mL）及腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)；培養(yǎng)物分別經(jīng)抗PD-1抗體、抗PD-1抗體與抗CTLA-4抗體聯(lián)合制劑或Volrustomig處理；收集T細(xì)胞裂解液用于總PD-1評估。Western blot結(jié)果代表2名供體的樣本結(jié)果]

圖12. 流式細(xì)胞術(shù)評估Volrustomig介導(dǎo)的PD-1降解作用[將4名健康供體的MART-1擴(kuò)增T細(xì)胞與MART1肽（5μg/mL）及腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)；通過流式細(xì)胞術(shù)定量檢測細(xì)胞內(nèi)PD-1和CTLA-4水平；細(xì)胞內(nèi)PD-1的倍數(shù)變化值以未處理T細(xì)胞為基準(zhǔn)進(jìn)行歸一化計(jì)算。樣本量N=4，配對單因素方差分析*p<0.05，**p<0.01]

綜上所述，本研究在人類抗原特異性免疫模型中進(jìn)一步證實(shí)了Volrustomig通過PD-1錨定協(xié)同結(jié)合CTLA-4以增強(qiáng)CTLA-4阻斷的功能機(jī)制，并闡明了該機(jī)制在促進(jìn)T細(xì)胞抗原特異性殺傷與細(xì)胞因子釋放中的關(guān)鍵作用。尤其重要的是，研究揭示了Volrustomig特有的PD-1降解能力，這進(jìn)一步從作用機(jī)制上將其與傳統(tǒng)的抗CTLA-4/抗PD-1抗體或二者聯(lián)合方案區(qū)分開來，為其在臨床開發(fā)中的差異化價(jià)值提供了關(guān)鍵臨床前依據(jù)。

總結(jié)及展望

上述證據(jù)共同表明，Volrustomig憑借其獨(dú)特的PD-1/CTLA-4雙特異性結(jié)構(gòu)，通過“PD-1錨定”機(jī)制在腫瘤微環(huán)境中實(shí)現(xiàn)CTLA-4的高效選擇性阻斷，并誘導(dǎo)PD-1持續(xù)降解。這一作用機(jī)制的臨床轉(zhuǎn)化前景已獲得初步研究數(shù)據(jù)的支持。在晚期非鱗NSCLC一線治療中，一項(xiàng)Ib/II期研究顯示（NCT03530397），Volrustomig聯(lián)合化療相比帕博利珠單抗聯(lián)合化療，延長了中位緩解持續(xù)時(shí)間（20.5個(gè)月 vs 9.9個(gè)月），并在PD-L1＜1%的患者中表現(xiàn)出更高的客觀緩解率（ORR，55.6% vs 44.4%）7。2024年世界肺癌大會(WCLC)上公布的數(shù)據(jù)顯示，Volrustomig聯(lián)合化療在非鱗狀細(xì)胞癌(n=119)和鱗狀細(xì)胞癌(n=20)隊(duì)列的ORR分別為43.7%和65.0%，疾病控制率（DCR）分別為84.9%和95.0%8。目前，針對該藥物的多項(xiàng)關(guān)鍵III期臨床試驗(yàn)，包括eVOLVE-Lung02、eVOLVE-HNSCC及eVOLVE-Meso等已全面展開，旨在進(jìn)一步評估該藥物在肺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌及惡性胸膜間皮瘤等多種實(shí)體瘤中的療效與安全性。展望未來，隨著這些關(guān)鍵臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的披露，Volrustomig有望為腫瘤免疫治療提供一種新的雙特異性抗體療法，并為該類藥物的研發(fā)與臨床應(yīng)用確立新的方向。

參考文獻(xiàn)：

1. Hellmann MD, Paz-Ares L, Bernabe Caro R, et al. Nivolumab plus Ipilimumab in Advanced Non-Small-Cell Lung Cancer. N Engl J Med. 2019;381(21):2020-2031.

2. Carbone DP, Ciuleanu TE, Cobo M, et al. Nivolumab plus ipilimumab with chemotherapy as first-line treatment of patients with metastatic non-small-cell lung cancer: final, 6-year outcomes from CheckMate 9LA. ESMO Open. 2025;10(6):105123.

3. Johnson ML, Cho BC, Luft A, et al. Durvalumab With or Without Tremelimumab in Combination With Chemotherapy as First-Line Therapy for Metastatic Non-Small-Cell Lung Cancer: The Phase III POSEIDON Study. J Clin Oncol. 2023;41(6):1213-1227.

4. Dovedi SJ, Elder MJ, Yang C, et al. Design and Efficacy of a Monovalent Bispecific PD-1/CTLA4 Antibody That Enhances CTLA4 Blockade on PD-1+ Activated T Cells. Cancer Discov. 2021;11(5):1100-1117.

5. Brailey PM, Gar?on F, Dallaway L, et al. Volrustomig drives superior CTLA-4 blockade, induces sustained PD-1 degradation, and enhances T cell function ex vivo. 2025 ESMO IO. 288P.

6. Gerada C, Hair J, Songvilay S, et al. Volrustomig co-operatively binds to PD-1 and CTLA-4 and causes PD-1 degradation in tumour antigen specific T cells. 2025 ESMO IO. 412P.

7. Ahn MJ, Kim SW, Costa EC, et al. LBA56 MEDI5752 or pembrolizumab (P) plus carboplatin/pemetrexed (CP) in treatment-na?ve (1L) non-small cell lung cancer (NSCLC): A phase Ib/II trial[J]. Annals of Oncology, 2022, 33: S1423.

8. Spigel DR, Ahn MJ, Majem M, et al. Volrustomig + platinum doublet chemotherapy in first-line nonsmall-cell lung cancer (NSCLC): Phase 1b trial update. 2024 WCLC. OA11.04.

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