師弟

WB 要不跑不齊，要不結(jié)果重復(fù)性差！555

師弟

樣本和抗體馬上就要沒(méi)有了，就連 beta-actin 都讓我用完一管了！

emmm.... 其實(shí)跑 WB 不用管家蛋白做內(nèi)參，或許更精準(zhǔn)～

師姐

師弟

不用內(nèi)參？這怎么可能呢？老板不要罵死我！

我的意思是不用管家蛋白，內(nèi)參還是要有的，不然怎么證明上樣量是齊的？

師姐

你了解一下 Stain-Free 技術(shù)吧，它是一種無(wú)需傳統(tǒng)染色和內(nèi)參的 WB 技術(shù)，通過(guò)直接檢測(cè)總蛋白的熒光信號(hào)來(lái)定量分析目標(biāo)蛋白，最近隔壁實(shí)驗(yàn)室都改做 Stain-Free 了，還發(fā)了高分 SCI ，并且也是抑郁課題的研究，你來(lái)學(xué)學(xué)看，現(xiàn)在還有機(jī)會(huì)免費(fèi)試用（點(diǎn)擊此處申請(qǐng)?jiān)囉?/strong>）。

師姐

無(wú)需管家內(nèi)參，結(jié)果更可靠？

無(wú)需管家內(nèi)參，結(jié)果可靠有趨勢(shì)

在傳統(tǒng)的 WB 實(shí)驗(yàn)中，管家蛋白（如 GAPDH、β-actin 等）是必不可少的，用于校正樣本之間的差異，從而更準(zhǔn)確地反映目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。然而，內(nèi)參蛋白的表達(dá)可能會(huì)受到實(shí)驗(yàn)條件的影響，導(dǎo)致其表達(dá)水平不穩(wěn)定。例如，在不同的處理組中，內(nèi)參蛋白的表達(dá)可能會(huì)因?yàn)榧?xì)胞狀態(tài)、處理時(shí)間等因素而發(fā)生變化，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

而在【A Walnut-Derived Peptide WSPSGR Alleviates Depressive-Like Behaviors in Mice via IDO1 Inhibition and Gut Microbiota–Tryptophan Axis Modulation】這一論文中 [1]，研究人員使用了 Stain-Free 總蛋白染色技術(shù)替代傳統(tǒng)內(nèi)參，快速、準(zhǔn)確地測(cè)定每個(gè)泳道中的總蛋白量，從而為后續(xù)的 Western Blot 分析提供標(biāo)準(zhǔn)化的參考（圖 1）。這種方法不僅簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟，還提高了結(jié)果的可靠性。

圖 1 Stain-Free 定量總蛋白（左圖），協(xié)助檢測(cè)結(jié)腸和腦組織中 IDO1 蛋白的表達(dá)（右圖）

操作簡(jiǎn)便，縮短實(shí)驗(yàn)周期

傳統(tǒng)的 WB 實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣，包括樣本處理、蛋白提取、SDS - PAGE 電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗和二抗孵育、顯色等多個(gè)步驟。每個(gè)步驟都需要嚴(yán)格控制條件，稍有不慎就可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。此外，傳統(tǒng)的染色不僅耗時(shí)，還可能帶來(lái)誤差。

在論文中，研究人員使用了 Stain-Free 技術(shù)簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)步驟。具體方法如下：

Stain-Free 免染 Western 與傳統(tǒng) Western 實(shí)驗(yàn)流程對(duì)比表

總的來(lái)說(shuō)，Stain-Free 免染 Western 實(shí)驗(yàn)流程以 TGX Stain-Free 免染膠為核心，通過(guò) 15 分鐘電泳、最快 3 分鐘轉(zhuǎn)印實(shí)現(xiàn)蛋白快速分離與轉(zhuǎn)移，無(wú)需染色 / 脫色，可全程評(píng)估實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，電泳后 1 分鐘激發(fā)即可獲取總蛋白信號(hào)，結(jié)合 Image Lab 軟件自動(dòng)完成總蛋白歸一化定量，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)并提升結(jié)果準(zhǔn)確性。

20 μg 蛋白即可檢測(cè)，靈敏度高

Stain-Free 技術(shù)的一個(gè)顯著優(yōu)勢(shì)是其高靈敏度和良好的重復(fù)性。在論文中，研究人員上樣量?jī)H為 20 μg 蛋白。這種低上樣量不僅減少了蛋白的使用量，還提高了檢測(cè)的靈敏度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性非常好，多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果高度一致。

傳統(tǒng) Western Blot：通常需要20～50 μg的蛋白樣本，具體量取決于目標(biāo)蛋白的豐度和抗體的靈敏度。在一些情況下，可能需要50～100 μg或更高。

Stain-free 技術(shù)：在論文中，Stain-free 技術(shù)的上樣量為20 μg，這與傳統(tǒng)方法中的高靈敏度實(shí)驗(yàn)相當(dāng)。Stain-free 技術(shù)通過(guò)提高靈敏度和重復(fù)性，使得在較低的上樣量下也能獲得可靠的結(jié)果。

此外，由于實(shí)驗(yàn)步驟的簡(jiǎn)化，也減少了試劑的使用量，從而節(jié)省了實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

師弟

原來(lái)如此，那我也可以參考這篇論文中的方法，將 Stain-Free 技術(shù)設(shè)計(jì)到我的研究中？

沒(méi)錯(cuò)，你現(xiàn)在做的抑郁相關(guān)蛋白，比如小窩蛋白（Caveolin-1）和神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體（p75NTR），都可以通過(guò) Stain-Free 技術(shù)來(lái)定量總蛋白，結(jié)果更準(zhǔn)一些。

師姐

師弟

對(duì)哦！尤其是 Caveolin-1 ，我跑了 5 次，每次趨勢(shì)都不一樣！

Stain-Free 技術(shù)的靈敏度高，實(shí)驗(yàn)流程又快捷，而且不需要內(nèi)參，直接通過(guò)總蛋白的灰度值進(jìn)行校正，避免了內(nèi)參表達(dá)不穩(wěn)定的問(wèn)題，結(jié)果更可靠哦～

師姐

省時(shí)省錢：WB 結(jié)果雙保險(xiǎn)

Stain-Free 免染總蛋白技術(shù)利用含有專有三鹵化合物的聚丙烯酰胺凝膠，在電泳結(jié)束后，僅需 1 分鐘的紫外光激發(fā)，即可在凝膠中觀察到總蛋白的熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)蛋白定量和歸一化分析，從而避免了傳統(tǒng)方法中使用單一管家蛋白（如 GAPDH、β-actin）作為內(nèi)參的局限性。

其核心優(yōu)勢(shì)包括：

1

操作簡(jiǎn)便快捷，無(wú)需額外染色步驟，節(jié)省時(shí)間和試劑成本。

2

可直接評(píng)估總蛋白量，確保上樣量一致。

3

提供更全面、準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)定量結(jié)果，提高實(shí)驗(yàn)可靠性。

綜上，為了幫大家避免 WB 實(shí)驗(yàn)內(nèi)參不準(zhǔn)帶來(lái)時(shí)間與經(jīng)費(fèi)上的浪費(fèi)，我們特意準(zhǔn)備了 Stain-Free 免費(fèi)申請(qǐng)?jiān)囉靡约叭酌馊?Western 實(shí)驗(yàn)流程，請(qǐng)點(diǎn)擊下方小程序碼，立即獲取吧！

注：

1. 相關(guān)產(chǎn)品僅限科研使用，不作為臨床診斷。

2. Bio-Rad 是 Bio-Rad Laboratories，Inc. 在特定區(qū)域的商標(biāo)。

3. 本活動(dòng)的最終解釋權(quán)歸伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司。

內(nèi)容策劃：沈佳鈺

內(nèi)容審核：周育紅

題圖來(lái)源：文獻(xiàn)截圖[1]

參考文獻(xiàn)：

[1]. Xiao X, Ma A, Chen Z, Li S, Xia J, Ding S, Jia Y. A Walnut-Derived Peptide WSPSGR Alleviates Depressive-Like Behaviors in Mice via IDO1 Inhibition and Gut Microbiota-Tryptophan Axis Modulation. J Agric Food Chem. 2025 Oct 22;73(42):26780-26792. doi: 10.1021/acs.jafc.5c09940. Epub 2025 Oct 11. PMID: 41074849.