一份看起來澄清透明的干細胞制劑，可能隱藏著比細菌本身更頑固的安全威脅。當科研人員將目光聚焦于細胞活性和增殖能力時，另一個看不見的指標正在默默決定著臨床應用的成敗。

早上8點，位于蘇州的生物實驗室里，研究員小李正在準備今天的干細胞培養(yǎng)工作。她手中的培養(yǎng)基瓶標簽上清晰地標注著“內毒素＜0.1EU/ml”，這個數值甚至比國家基礎標準嚴格了10倍。

內毒素——這一看不見的威脅，正成為制約細胞治療技術從實驗室走向臨床的關鍵瓶頸。

01 風險定義

內毒素，學名脂多糖，是革蘭氏陰性細菌細胞壁外壁的關鍵組成部分。它的獨特之處在于，即使細菌死亡，這種毒素仍能保持其生物活性。

一旦進入人體血液循環(huán)系統(tǒng)，即使是微量內毒素也可能引發(fā)嚴重后果。研究表明，劑量僅為>5EU/kg體重的內毒素就足以導致人體發(fā)熱、寒戰(zhàn)，甚至休克等急性炎癥反應。

在細胞治療領域，內毒素帶來的風險是雙重的。它既可能直接影響接受治療的患者，也可能改變待注射細胞本身的特性和功能。

02 雙重威脅

細胞療法與傳統(tǒng)藥物的最大區(qū)別在于，它注入患者體內的不是化學分子，而是具有生命的細胞。這種特殊性使得內毒素控制顯得尤為關鍵。

內毒素是一種高效的生物反應調節(jié)劑，在細胞治療中若作為污染物存在，可能從兩個層面造成威脅：

一是對患者的直接影響，內毒素進入血液后可引起熱原反應和一系列可能的影響，包括感染性休克甚至死亡；

二是對治療細胞的改變，內毒素可能誘導有絲分裂、刺激細胞因子產生、引起形態(tài)變化和細胞毒性，從而完全改變細胞的性質與治療價值。

舉例來說，Vargas等研究人員曾在胰島移植研究中發(fā)現，內毒素污染可能是導致移植失敗的不明原因。

這一發(fā)現提醒我們，即便細胞本身狀態(tài)良好，內毒素污染也可能直接導致治療失敗。

03 檢測要求

隨著細胞治療行業(yè)的發(fā)展，相應的檢測規(guī)范也在不斷完善。根據2024年發(fā)布的《人牙髓干細胞檢驗規(guī)范》，細菌內毒素被明確列為安全性檢測的關鍵指標之一。

同樣，國家干細胞轉化資源庫的檢測技術要求也明確規(guī)定，干細胞制劑必須依據現行版《中華人民共和國藥典》中的內毒素檢測規(guī)程，采用凝膠法對內毒素進行檢測。

傳統(tǒng)的內毒素檢測方法主要有以下幾種：

· 家兔熱原法，是最早的熱原檢查方法，利用家兔對熱原的反應與人基本相似的特點進行檢測。

· 鱟試劑法，包括凝膠法和光度測定法，是目前最常用的檢測方法，具有操作簡便、靈敏度高的優(yōu)點。

· 重組C因子法，作為新興的檢測技術，避免了傳統(tǒng)方法對自然資源（鱟）的依賴，更具環(huán)保和可持續(xù)性。

在實際操作中，檢測細胞治療產品中的內毒素面臨獨特挑戰(zhàn)。未稀釋的細胞懸浮液可能會干擾光度法檢測，而來自不同供體的相同類型細胞制劑也可能具有不同的干擾特性。

04 標準差異

不同疾病領域和產品類型對內毒素控制的要求差異顯著，這主要基于給藥途徑和臨床風險的綜合評估。

靜脈注射制劑是要求最嚴格的類別，直接進入血液循環(huán)，風險最高。通常標準是每微克蛋白內毒素不超過0.01-0.1EU。

局部注射制劑，如皮下或肌肉注射，吸收較慢，要求相對寬松。標準通常是每微克蛋白內毒素不超過0.1-0.5EU。

特殊細胞治療產品，如干細胞制劑，除了考慮患者安全，還需防止內毒素改變細胞特性。常規(guī)標準是參照注射劑的要求<0.25EU/ml，行業(yè)先進標準已達到 <0.1EU/ml。

不同產品形態(tài)和用途的內毒素標準對比：

· 基因治療產品（質粒DNA）：要求內毒素含量極低，通常需<0.1EU/μg DNA

· 注射用治療性蛋白：通常要求≤0.01~0.1EU/μg蛋白

· rAAV病毒載體：行業(yè)普遍標準為<10EU/ml，優(yōu)質產品可達到<2.5EU/ml

· 干細胞培養(yǎng)基（基礎要求）：根據歷史標準，細胞培養(yǎng)基的細菌內毒素一般要求≤1EU/ml

· 干細胞培養(yǎng)基（先進標準）：行業(yè)領先的干細胞無血清培養(yǎng)基內毒素標準已達到<0.1EU/ml

05 控制策略

有效的內毒素控制是一個系統(tǒng)工程，需要從源頭到終點的全鏈條管理。

原料嚴格篩選是控制內毒素的第一步。以細胞培養(yǎng)基為例，傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)基由于血清成分復雜，是內毒素污染的主要源頭之一。而無血清、化學成分限定的培養(yǎng)基可以從源頭上大幅降低內毒素引入風險。

工藝優(yōu)化設計在內毒素去除中起著決定性作用。目前行業(yè)內形成了多種有效的內毒素去除工藝，包括陰離子交換層析、疏水層析、凝膠過濾層析和親和層析等。

其中陰離子交換層析利用內毒素在pH>2時帶負電的特性，通過帶正電荷的填料結合并去除內毒素；而親和層析則使用特異性吸附內毒素的配基，能夠高效去除樣品中的內毒素。

全程質量監(jiān)控確保內毒素含量始終處于受控狀態(tài)。這不僅包括最終產品的檢測，還應涵蓋中間品檢測和穩(wěn)定性驗證，確保產品在有效期內不會因降解或二次污染導致內毒素升高。

06 行業(yè)標桿

在細胞治療行業(yè)快速發(fā)展的今天，對培養(yǎng)基質量的要求也日益提高。傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)基標準通常將內毒素限制在1EU/ml，但隨著干細胞治療向臨床應用推進，這一標準已無法滿足安全需求。

蘇州華辰生物推出的novastem-MSC 間充質干細胞無血清培養(yǎng)基、novaNK-20 NK細胞無血清培養(yǎng)基，將內毒素標準提升至<0.1EU/ml的超低水平。這一數值不僅遠高于行業(yè)基礎要求，也為細胞生產提供了更可靠的安全基礎。

該產品采用化學成分限定的配方，避免了傳統(tǒng)血清培養(yǎng)基中復雜成分帶來的風險。華辰生物的所有nova系列培養(yǎng)基已完成FDA的藥物主文件備案，表明其生產工藝和質量控制已達到國際標準。

在蘇州華辰生物的培養(yǎng)基生產線上，每一個批次的產品都要經過嚴格的內毒素檢測。0.1EU/ml不僅是印在標簽上的數字，更是無數次實驗驗證的安全邊界。

當這些培養(yǎng)基被運往全國各地的實驗室和細胞治療機構時，它們攜帶的不僅是營養(yǎng)細胞的基礎物質，更是行業(yè)對安全底線的共同堅守。

降低內毒素標準的技術競賽仍在繼續(xù)，而終點始終如一——讓每一份細胞制劑都能安全地抵達需要它的患者體內。