中文摘要

目的評價(jià)阿達(dá)木單抗注射液的運(yùn)輸穩(wěn)定性。

方法以武漢市至哈爾濱市作為公路運(yùn)輸起止點(diǎn)，進(jìn)行1次往返運(yùn)輸，模擬藥品運(yùn)輸過程的最差條件，以考察非溫度因素條件下的藥品穩(wěn)定性。以極端溫度及溫度循環(huán)等破壞性試驗(yàn)來模擬藥品脫冷鏈后的情況，通過檢測阿達(dá)木單抗注射液常規(guī)質(zhì)量檢定項(xiàng)目考察藥品溫度偏移穩(wěn)定性。

結(jié)果運(yùn)輸后3批次藥品內(nèi)包材均完整，破瓶率為0%，所有檢測項(xiàng)目均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，藥品運(yùn)輸前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-3.23~4.00，P=0.057~0.840)。3批次藥品分別在(40±2) ℃、(-20±5) ℃條件下放置7 d后所有檢測項(xiàng)目均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。其中藥品在(40±2) ℃條件下放置7 d后，分子排阻色譜法測定的單體含量和離子色譜法測定的純度與2~8 ℃及(-20±5) ℃下的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-142.00~97.00，P=0.000~0.020)。(-20±5) ℃條件下放置7 d后，藥品所有檢定項(xiàng)目與2~8 ℃條件下差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.70~3.46，P=0.074~0.556)。3批次藥品經(jīng)過3次凍融后所有檢測項(xiàng)目均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，與未經(jīng)凍融試驗(yàn)樣品差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-4.06~1.73，P=0.056~0.478)。

結(jié)論在本實(shí)驗(yàn)條件下長途運(yùn)輸非溫度因素對藥品的質(zhì)量沒有影響，藥品在短期內(nèi)溫度偏移對藥品的質(zhì)量影響較小。

正文

重組全人源化抗TNF-α單克隆抗體（單抗）注射液阿達(dá)木單抗在中國倉鼠卵巢細(xì)胞中表達(dá)，用于治療自身免疫性疾病，由美國艾伯維公司原研上市，商品名為修美樂?。在中國，阿達(dá)木單抗自上市以來獲批類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病等8個(gè)適應(yīng)證。由于藥品出廠后經(jīng)歷的流通環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)及在后續(xù)配送、儲(chǔ)存過程中可能出現(xiàn)的溫度偏移，均有可能影響藥品質(zhì)量，從而影響藥品安全性和有效性，因此在上市前進(jìn)行藥品運(yùn)輸穩(wěn)定性評估尤為重要。國內(nèi)外法規(guī)雖均明確要求對產(chǎn)品的運(yùn)輸過程進(jìn)行相應(yīng)的穩(wěn)定性模擬驗(yàn)證研究，但并未明確如何模擬流通過程中真實(shí)的運(yùn)輸路徑及環(huán)境。本研究以阿達(dá)木單抗注射液為研究對象進(jìn)行藥品運(yùn)輸穩(wěn)定性研究，參考美國注射劑協(xié)會(huì)有關(guān)支持分銷的新藥穩(wěn)定性研究指南進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；經(jīng)風(fēng)險(xiǎn)評估，確定模擬運(yùn)輸最極端且最有代表性的運(yùn)輸條件，通過非溫度因素和溫度因素研究綜合評價(jià)藥品在運(yùn)輸條件下的質(zhì)量是否符合該制品的企業(yè)上市注冊標(biāo)準(zhǔn)（企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)）。

1

材料與方法

1.1

樣品

3批阿達(dá)木單抗注射液（產(chǎn)品批號：202303001、202303002、202303003），由武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司（武漢公司）提供。

1.2

細(xì)胞

檢定用細(xì)胞L929（小鼠成纖維瘤細(xì)胞）來源于中國食品藥品檢定研究院，細(xì)胞庫批號為201104001，由武漢公司保存。

1.3

主要試劑及儀器

阿達(dá)木單抗注射液參比品由武漢公司提供，批號為20201001。MULTISKAN FC型和SkyHIGH型酶標(biāo)儀購自美國Thermo Scientific公司，ThermoMixer C恒溫混勻儀購自德國Eppendorf公司，OSMOMAT auto型冰點(diǎn)滲透壓儀購自德國Gonotec GmbH公司，UV-2600i型紫外分光光度計(jì)購自日本島津公司，S210型pH計(jì)購自瑞士Mettler Toledo公司，e2695/2489型高效液相色譜儀購自美國Waters公司，HTY-APL01型集菌儀購自浙江泰林生物技術(shù)股份有限公司，PA800 plus型毛細(xì)管電泳儀購自美國SCIEX公司，iCE3/PrinNext型全柱成像毛細(xì)管等電聚焦電泳系統(tǒng)購自美國ProteinSimple公司，A2000 SIS型不溶性微粒儀購自美國PSS公司，YB-ⅡA型澄明度檢測儀購自天津天光新光學(xué)儀器科技有限公司，Zillion Veripac 455-M5型密封性檢測儀購自美國Protein Technologies公司。

1.4

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4.1　模擬運(yùn)輸路線的選擇及設(shè)計(jì)思路回顧武漢公司歷史產(chǎn)品發(fā)運(yùn)情況，選擇武漢市→哈爾濱→武漢的運(yùn)輸路線，該路線往返運(yùn)輸距離約5 000 km，可覆蓋武漢公司最遠(yuǎn)運(yùn)輸距離和最長運(yùn)輸時(shí)間，運(yùn)輸過程不可避免地經(jīng)歷顛簸、振動(dòng)、碰撞、搬運(yùn)等異常情況。另外該運(yùn)輸路線具有地域跨度大、南北溫度濕度差異大、高低氣壓交替等特點(diǎn)。綜合考慮后認(rèn)為此運(yùn)輸路線可以作為最極端且最有代表性的運(yùn)輸條件。

1.4.2　非溫度因素研究選取經(jīng)驗(yàn)證合格的2~8 ℃冷鏈車作為運(yùn)輸交通工具，按照武漢公司冷庫→裝載至冷鏈車→冷鏈車公路運(yùn)輸→哈爾濱→冷鏈車公路運(yùn)輸→武漢公司冷庫路線進(jìn)行運(yùn)輸，運(yùn)輸時(shí)間不超過4 d。3批待考察藥品按照上市運(yùn)輸包裝形式進(jìn)行包裝，按照實(shí)際運(yùn)輸方式放置于冷鏈車內(nèi)，并根據(jù)日常冷鏈車最大裝載量堆放制品外箱，以模擬冷鏈車滿載狀態(tài)。運(yùn)輸過程中開門5次，冷鏈車到達(dá)途中站點(diǎn)停車，開啟冷鏈車門，環(huán)境溫度在2 ℃以上時(shí)，開門時(shí)間不超過20 min，環(huán)境溫度在-10～-2 ℃之間時(shí)，開門時(shí)間不超過10 min，環(huán)境溫度在-18～-10 ℃之間時(shí)，開門時(shí)間不超過5 min，進(jìn)行藥品冷鏈運(yùn)輸模擬實(shí)驗(yàn)。運(yùn)輸結(jié)束后檢查并記錄外箱包裝外觀完整性、運(yùn)輸制品完整性、破瓶數(shù)及破損率，并對藥品進(jìn)行外觀、澄清度、可見異物、不溶性微粒、裝量、pH值、蛋白質(zhì)含量、滲透壓摩爾濃度、單體含量（分子排阻色譜法測定）、純度（單抗分子大小變異體測定法和離子色譜法測定）、生物學(xué)活性、聚山梨酯80含量、無菌、細(xì)菌內(nèi)毒素、異常毒性、密封性等質(zhì)量檢定項(xiàng)目檢測。

1.4.3　溫度偏移研究

1.4.3.1　極端溫度實(shí)驗(yàn)將2~8 ℃儲(chǔ)存的3批次藥品，分別于（40±2） ℃、（-20±5） ℃條件下放置7 d。實(shí)驗(yàn)完成后對每批藥品進(jìn)行與非溫度因素研究相同項(xiàng)目的檢測，考察藥品在極端溫度條件下的穩(wěn)定性。

1.4.3.2　溫度循環(huán)實(shí)驗(yàn)將2~8 ℃儲(chǔ)存的3批次藥品置于（-20±5） ℃冰箱2 d，然后轉(zhuǎn)移至（25±2） ℃藥品綜合穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)箱放置2 d，完成1次溫度循環(huán)實(shí)驗(yàn)。繼續(xù)將3批次藥品再次置于（-20±5） ℃條件2 d，然后轉(zhuǎn)移至（25±2） ℃條件放置2 d，完成第2次溫度循環(huán)實(shí)驗(yàn)，重復(fù)以上操作，每批藥品均進(jìn)行3次溫度循環(huán)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)完成后對每批藥品進(jìn)行與非溫度因素研究相同項(xiàng)目的檢測?？疾焖幤吩诜磸?fù)凍融條件下的穩(wěn)定性。

1.5

檢測項(xiàng)目及方法

1.5.1　物理化學(xué)性質(zhì)依據(jù)中華人民共和國藥典2020年版三部（藥典三部）通則，對藥品的澄清度（通則0902）、可見異物（通則0904）、不溶性微粒（通則0903）、裝量（通則0102）、pH值（通則0631）、蛋白質(zhì)含量（通則0731）、滲透壓摩爾濃度（通則0632）、分子排阻色譜法單體含量（通則0514）、單抗分子大小變異體測定法純度（通則3127）、離子色譜法純度（通則0513）、聚山梨酯80含量（通則3203）、細(xì)菌內(nèi)毒素（通則1143，凝膠法）等進(jìn)行檢測，密封性通過密封性檢測儀進(jìn)行檢測。

1.5.2　生物學(xué)活性采用TNF-α中和活性法測定阿達(dá)木單抗注射液的生物學(xué)活性。將系列稀釋的阿達(dá)木單抗參比品/供試品與TNF-α混合后加至L929細(xì)胞培養(yǎng)，使用的染料結(jié)晶紫可使活細(xì)胞染色，再用脫色液將染料脫出，測定其吸光度值，通過計(jì)算供試品和參比品的有效中量（median effective dose，ED50）得到供試品的生物學(xué)活性=參比品的ED50 /供試品ED50 ×100% ，生物學(xué)活性應(yīng)為80%~125%。

1.5.3　無菌檢查依據(jù)藥典三部通則1101，對藥品進(jìn)行無菌檢查。

1.5.4　異常毒性依據(jù)藥典三部通則1141，對藥品異常毒性進(jìn)行檢測。

1.6

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Minitab 20 軟件對運(yùn)輸前后各指標(biāo)進(jìn)行配對樣本t檢驗(yàn)，比較運(yùn)輸前后各指標(biāo)的差異性，結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。利用Minitab 20軟件對溫度偏移和溫度循環(huán)研究中各指標(biāo)進(jìn)行配對樣本t檢驗(yàn)，以儲(chǔ)存于2~8 ℃未經(jīng)凍融的對應(yīng)批次藥品作為對照，比較藥品溫度偏移及3次溫度循環(huán)條件下與對照組各指標(biāo)的差異性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2

結(jié)果

2.1

非溫度因素研究

本次運(yùn)輸總路程4 750 km，總時(shí)長76 h 15 min，運(yùn)輸過程中冷鏈車車廂2個(gè)點(diǎn)位最低溫度分別為3.1 ℃和3.4 ℃，最高溫度分別為6.4 ℃和6.5 ℃，運(yùn)輸全程車廂溫度均在2~8 ℃范圍內(nèi)。阿達(dá)木單抗注射液往返運(yùn)輸結(jié)束后，3個(gè)批次的藥品內(nèi)包材均完整，破瓶率為0%；藥品的pH值和分子排阻色譜法測定的抗體單體含量在運(yùn)輸前后無變化，所有檢測項(xiàng)目在運(yùn)輸前后差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，見表1。

2.2

溫度偏移研究

2.2.1　極端溫度實(shí)驗(yàn)3批次阿達(dá)木單抗注射液分別在（40±2） ℃、（-20±5） ℃條件下放置7 d后，藥品的所有檢測項(xiàng)目均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。（40±2） ℃條件下放置7 d后，分子排阻色譜法單體含量與2~8 ℃及（-20±5） ℃下的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.00，P=0.008；t=-7.00，P=0.020）；離子色譜法純度與2~8 ℃及（-20±5） ℃下的差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（賴氨酸變異體含量：t=97.00、P=0.000，t=-14.36、P=0.005；第一酸區(qū)含量：t=-50.00、P=0.000，t=10.00、P=0.010；第二酸區(qū)含量：t=-142.00、P=0.000，t=22.26、P=0.002；賴氨酸變異體之間的峰：t=-17.00、P=0.003，t=29.00、P=0.001）。（-20±5） ℃條件下放置7 d后，藥品所有檢定項(xiàng)目與2~8 ℃條件下差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.70~3.46，P=0.074~0.556）。不同溫度條件下的離子色譜法純度和分子排阻色譜法單體含量檢測結(jié)果見圖1。

2.2.2　溫度循環(huán)實(shí)驗(yàn)3批次藥品經(jīng)過3次凍融后所有檢測項(xiàng)目均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，與未經(jīng)凍融試驗(yàn)樣品差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

3

根據(jù)中國2015年4月發(fā)布的《生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》和中華人民共和國藥典2020年版四部中“生物制品穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則”要求，對需冷鏈運(yùn)輸和保存的產(chǎn)品，應(yīng)開展運(yùn)輸過程穩(wěn)定性模擬驗(yàn)證研究。阿達(dá)木單抗注射液為抗體類生物制品，需要低溫貯藏，由于藥品在運(yùn)輸過程中可能出現(xiàn)短暫的脫離冷鏈或溫度偏移情況，因此需進(jìn)行運(yùn)輸穩(wěn)定性考察，為實(shí)際運(yùn)輸過程中短暫偏離規(guī)定的貯藏條件提供穩(wěn)定性數(shù)據(jù)支持。

本研究充分考慮了非溫度因素和溫度因素對藥品運(yùn)輸?shù)挠绊憽７菧囟纫蛩匕\(yùn)輸路線、交通工具、運(yùn)輸距離、運(yùn)輸時(shí)間、裝載模式、外界環(huán)境以及運(yùn)輸過程中可能遇到的最極端和最具代表性條件。在運(yùn)輸最大裝載量（貨物堆放80%車廂容積以上），冷鏈溫度為2~8 ℃，最遠(yuǎn)公路冷鏈車運(yùn)輸路線包含低緯度（武漢）-高緯度（哈爾濱）-低緯度（武漢），運(yùn)輸過程中模擬開門5次，運(yùn)輸路程4 750 km的前提下，運(yùn)輸前后各質(zhì)量指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，均在企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)合格范圍內(nèi)，證明了藥品在運(yùn)輸過程中于2～8 ℃保存可以保持藥品的穩(wěn)定性。對于運(yùn)輸對藥品效期的影響，目前相關(guān)研究正在進(jìn)行中。

溫度偏移穩(wěn)定性研究中，極端溫度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示3批次藥品分別在（40±2） ℃、（-20±5） ℃條件下放置7 d后藥品的所有檢測項(xiàng)目均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。其中（40±2） ℃條件下放置7 d后，分子排阻色譜法單體含量與2~8 ℃及（-20±5） ℃條件下相比有輕微下降，均下降0.2%，與2~8 ℃及（-20±5） ℃差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；離子色譜法純度與2~8 ℃及（-20±5） ℃條件下相比也均有一定變化，其中賴氨酸變異體含量分別下降6.4%和2.6%，第一酸區(qū)含量分別上升1.6%和0.6%，第二酸區(qū)分別上升4.7%和3.3%，賴氨酸變異體之間的峰分別上升1.2%和1.0%，與2~8 ℃及（-20±5） ℃差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。藥品在（-20±5） ℃條件下放置7 d后，所有檢定項(xiàng)目與2~8 ℃條件下的結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明模擬在極端高溫暴露對藥品的質(zhì)量有一定影響，而極端低溫對藥品質(zhì)量無明顯影響。極端溫度下放置7 d藥品的所有檢測項(xiàng)目均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)且遠(yuǎn)高于合格標(biāo)準(zhǔn)要求，本次實(shí)際模擬運(yùn)輸總時(shí)長76 h 15 min，表明藥品在運(yùn)輸或貯存過程中短暫（≤7 d）的暴露于極端溫度條件下不影響藥品的質(zhì)量可控性，藥品在運(yùn)輸過程中應(yīng)避免長時(shí)間極端高溫。藥品在3次反復(fù)凍融后各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，與凍融前差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究通過非溫度因素研究和溫度偏移研究充分模擬了阿達(dá)木單抗的運(yùn)輸極端條件以考察其運(yùn)輸穩(wěn)定性。結(jié)果表明在較差的非溫度因素運(yùn)輸條件下，阿達(dá)木單抗可以保持藥品的質(zhì)量可控性。通過溫度偏移穩(wěn)定性研究，確認(rèn)了藥品在運(yùn)輸或貯存過程中溫度短暫（≤7 d）超過規(guī)定的貯存溫度時(shí)對藥品質(zhì)量的影響，為藥品在實(shí)際運(yùn)輸過程中可能出現(xiàn)的短暫偏離規(guī)定貯藏條件的情況提供了穩(wěn)定性數(shù)據(jù)支持。此外，本研究為抗體類藥品運(yùn)輸穩(wěn)定性的考察提供了實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，對其他抗體類藥品的運(yùn)輸穩(wěn)定性研究具有一定的參考價(jià)值。

作者

楊溢民1 童倩1 李亞楠1 劉瑞宇1 王俊2 楚樂樂1 康子航1 王睿龍1 李智龍1 解庭波1

1武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司抗體藥物室， 武漢 430207；2武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司質(zhì)量保證部，武漢 430207

通信作者：解庭波，

Email：xietingbo2011@163.com

引用本文：楊溢民, 童倩, 李亞楠, 等. 阿達(dá)木單抗注射液運(yùn)輸穩(wěn)定性初步研究[J]. 國際生物制品學(xué)雜志, 2025, 48(6): 400-405.

DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20250516-00032

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