自 2017 年 Novartis 的 Kymriah 和 Kite Pharma 的 Yescarta 獲批上市，CAR-T 細胞療法徹底重塑了 B 細胞惡性腫瘤的治療格局。當(dāng)前主流的體外（ex vivo）CAR-T 制備流程繁復(fù)，需經(jīng)歷細胞采集、基因修飾與擴增等步驟，不僅生產(chǎn)周期長、成本高，還高度依賴個體化細胞來源，在可擴展性、可及性及全球部署方面受限明顯。

為突破這一瓶頸，體內(nèi)（in vivo）CAR-T 細胞工程策略應(yīng)運而生。該技術(shù)通過病毒載體或非病毒納米遞送系統(tǒng)，將 CAR 基因直接導(dǎo)入患者體內(nèi) T 細胞，使其在生理環(huán)境中原位編程、擴增并發(fā)揮功能。相較于傳統(tǒng)體外模式，體內(nèi) CAR-T 大幅簡化制造鏈條，無需或減少體外加工步驟，推動 “即用型” 免疫治療發(fā)展，在臨床可擴展性、成本控制和普惠性上實現(xiàn)根本性提升。

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一、In Vivo 相較 Ex Vivo 技術(shù)路徑的核心優(yōu)勢（一）體外 CAR-T 的核心挑戰(zhàn)

傳統(tǒng)體外 CAR-T 流程依賴體外采集、擴增與回輸，操作繁瑣且周期長，制約規(guī)?；a(chǎn)與全球可及性；患者需接受淋巴耗竭預(yù)處理，不僅增加化療毒性，還限制高齡或體弱患者使用；僅針對單一 T 細胞群體改造，免疫反應(yīng)缺乏全面性與持久性；“清空 — 重建” 模式易產(chǎn)生免疫空窗期，提升感染風(fēng)險與療效不確定性。

（二）體內(nèi) CAR-T 的顯著優(yōu)勢

體內(nèi) CAR-T 無需體外采集與擴增，操作流程大幅簡化，生產(chǎn)可擴展性與全球可及性顯著提升；部分平臺可減少或避免淋巴耗竭預(yù)處理，降低化療毒性，拓寬適用人群；能同步或序貫改造多類內(nèi)源免疫細胞，激活更全面的免疫反應(yīng)，實現(xiàn)對腫瘤或病灶的持久控制；以 “激活宿主免疫” 為核心，規(guī)避傳統(tǒng)模式的免疫空窗期。

在遞送層面，mRNA 或可控載體策略支持劑量可調(diào)與表達時長可控：LNP-mRNA 實現(xiàn)瞬時表達以滿足快速反應(yīng)需求，整合型慢病毒或基因編輯策略則可達成長期 CAR 表達，精準匹配不同適應(yīng)癥對療效、安全性及暴露窗口的要求。

圖 1： 體外（Ex vivo）CAR-T 細胞治療與體內(nèi)（In vivo）CAR-T 細胞治療

二、In Vivo CAR-T 核心技術(shù)平臺

基因遞送載體是體內(nèi) CAR-T 細胞生成的核心，其選擇與設(shè)計直接決定治療的靶向特異性、基因工程效率及整體安全性。目前主流遞送載體平臺包括慢病毒載體（LVs）和脂質(zhì)納米顆粒載體（LNP）。

圖 2. 基于病毒載體遞送平臺和脂質(zhì)納米顆粒載體遞送平臺示意圖

（一）慢病毒載體遞送平臺：實現(xiàn)長期穩(wěn)定表達

圖 3. 病毒載體遞送系統(tǒng)的作用機制

作用機制：以 Umoja anti-CD3 scFv 慢病毒載體為例，載體表面的 anti-CD3 scFv 特異性結(jié)合 T 細胞表面 CD3 分子，通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞；在 Cocal 糖蛋白介導(dǎo)下，病毒包膜與內(nèi)體膜融合，釋放 RNA 并逆轉(zhuǎn)錄為雙鏈 DNA，整合至宿主基因組，驅(qū)動 CAR 蛋白穩(wěn)定表達，賦予 T 細胞特異性抗原識別與殺傷功能。

核心挑戰(zhàn)：存在脫靶轉(zhuǎn)導(dǎo)與天然趨向性問題，靶向精度不足；隨機整合可能引發(fā)基因毒性；免疫原性高，限制重復(fù)給藥；大規(guī)模 GMP 生產(chǎn)難度大，需保障批次一致性、載體滴度及穩(wěn)定性。

前沿突破：通過 VSV-G 關(guān)鍵殘基突變或副黏病毒假型化提升靶向精度；在 CAR 構(gòu)建體中整合 T 細胞激活與共刺激信號，增強抗腫瘤效力；采用 T 細胞特異性啟動子與安全開關(guān)，結(jié)合優(yōu)化載體骨架，降低脫靶風(fēng)險與免疫原性。

圖 4. LVs 的靶向重定向策略

（二）脂質(zhì)納米顆粒載體遞送平臺：實現(xiàn)瞬時靈活表達

圖 5. 靶向型脂質(zhì)納米顆粒載體遞送系統(tǒng)的作用機制

作用機制：以靶向 CD5 脂質(zhì)納米顆粒載體（tLNP）為例，tLNP 通過表面偶聯(lián)抗體識別 T 細胞表面 CD5 分子，經(jīng)受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞；內(nèi)體酸化誘導(dǎo)脂質(zhì)質(zhì)子化，破壞內(nèi)體膜結(jié)構(gòu)，使 mRNA 逃逸至胞質(zhì)并直接翻譯為 CAR 蛋白，賦予 T 細胞特定抗原識別與效應(yīng)功能。

核心挑戰(zhàn)：生物分布呈肝臟富集特性，向淋巴器官或循環(huán) T 細胞的遞送效率有限；mRNA 表達短暫，難以滿足長期免疫監(jiān)視需求；內(nèi)體逃逸效率低，偶聯(lián)抗體可能引發(fā)免疫原性；復(fù)雜 LNP 制備的批次一致性與長期穩(wěn)定性面臨技術(shù)和監(jiān)管挑戰(zhàn)。

前沿突破：開發(fā)靶向性 LNP（tLNP）與選擇性器官靶向 LNP（SORT-LNP），規(guī)避肝臟富集；通過環(huán)狀 RNA、基因編輯技術(shù)延長表達時長，優(yōu)化密碼子增強 mRNA 穩(wěn)定性；采用小片段靶向分子替代全長抗體，降低免疫原性并簡化生產(chǎn)。

圖 6. tLNPs 的靶向重定向策略及 CAR 基因遞送示意圖

三、臨床進展：從實驗室走向臨床

目前全球尚無體內(nèi) CAR-T 產(chǎn)品獲批上市，該技術(shù)正處于從概念驗證向早期臨床開發(fā)的關(guān)鍵過渡期。自 2017 年首次完成概念性驗證以來，已構(gòu)建起從基礎(chǔ)機制、遞送技術(shù)到臨床探索的完整發(fā)展軌跡。

臨床前研究聚焦病毒與非病毒載體的系統(tǒng)優(yōu)化，持續(xù)改良定向遞送效率、靶細胞特異性、表達調(diào)控及安全性等關(guān)鍵參數(shù)。隨著技術(shù)迭代，臨床研發(fā)加速推進，截至 2025 年底，全球已登記超過 30 項體內(nèi) CAR-T 臨床試驗，病毒載體與非病毒載體平臺均已公布首批人體臨床數(shù)據(jù)。

圖 7. In vivo CAR-T 從概念驗證到臨床轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵里程碑

（一）病毒載體驅(qū)動的臨床進展

多家企業(yè)形成多靶點、多策略競爭格局：Interius BioTherapeutics 的 INT2104 在動物實驗中表現(xiàn)顯著，已進入 I 期臨床試驗；Umoja Biopharma 的 UB-VV100、UB-VV111 等候選藥物相繼推進臨床；Genocury 的 JY231 在難治性 DLBCL 患者中實現(xiàn)完全緩解；EsoBiotec 的 ESO-T01 在首批受試者中獲得 100% 客觀緩解率，髓外病灶清除效果突出。

（二）LNP 載體驅(qū)動的臨床進展

基于 LNP 的體內(nèi) CAR 技術(shù)已拓展至血液腫瘤、實體瘤及自身免疫疾病領(lǐng)域：Myeloid Therapeutics 的 MT-302、MT-303 針對實體瘤，驗證了體內(nèi)快速誘導(dǎo)免疫效應(yīng)的可行性；Capstan Therapeutics 的 CPTX2309 進入健康受試者 I 期安全性研究；Shenzhen MagicRNA 的 HN2301 在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中表現(xiàn)出良好耐受性，為自身免疫疾病治療提供了有力證據(jù)。

病毒載體驅(qū)動的in vivo CAR-T平臺臨床進展

基于工程化病毒載體的in vivo CAR-T技術(shù)正加速從臨床前邁向臨床驗證，行業(yè)呈現(xiàn)多靶點、多策略并行的競爭格局，核心企業(yè)進展如下：

1.Interius BioTherapeutics：INT2104已進入首次人體臨床試驗（NCT06539338），在人源化小鼠中實現(xiàn)顯著腫瘤清除，食蟹猴中B細胞去除率≥75%；下一代候選藥INT2106聚焦自身免疫性疾病，彰顯平臺多領(lǐng)域拓展?jié)摿Α?/p>

2.Umoja Biopharma：依托Vivovec改造慢病毒載體平臺，UB-VV111（增強T細胞活化擴增）獲FDA批準進入臨床，UB-VV400同步推進臨床；UB-VV100在人源化小鼠中實現(xiàn)高效B細胞清除，犬模型中展現(xiàn)主要免疫組織轉(zhuǎn)導(dǎo)特性。

3.Genocury：JY231在1例難治性DLBCL患者中實現(xiàn)35天完全緩解（CR），驗證了體內(nèi)CAR-T的臨床可行性，但仍依賴單采與淋巴清除，未完全脫離體外流程。

4.Kelonia Therapeutics：BCMA靶向藥物KLN-1010（基于iGPS?平臺）進入I期臨床（NCT07075185），在小鼠及食蟹猴模型中表現(xiàn)出良好安全性與顯著靶向清除效果。

5.EsoBiotec：ESO-T01平臺通過多重工程化（包膜突變、T細胞靶向等）實現(xiàn)高T細胞選擇性與免疫逃逸；首批4名受試者客觀緩解率100%（2例CR、2例PR），體內(nèi)擴增持續(xù)性接近商業(yè)化產(chǎn)品，髓外病灶清除表現(xiàn)突出，具突破性潛力。

基于LNP的體內(nèi)CAR-T平臺進展

基于LNP的體內(nèi)CAR技術(shù)正快速拓展應(yīng)用邊界，覆蓋血液腫瘤、實體瘤及自身免疫疾病，可實現(xiàn)多類免疫細胞原位工程化，展現(xiàn)出廣泛發(fā)展?jié)摿Α?/p>

核心企業(yè)及項目進展如下：

1.Myeloid Therapeutics：旗下MT-302（TROP2-CAR）、MT-303（GPC3-CAR）為首批實體瘤靶向體內(nèi)CAR-髓系細胞候選藥，通過mRNA-LNP重編程髓系細胞表達CD89，早期研究證實可快速誘導(dǎo)循環(huán)髓系細胞表達CAR，實現(xiàn)腫瘤組織共定位并激活免疫信號，驗證了體內(nèi)快速誘導(dǎo)免疫效應(yīng)的可行性。

2.Capstan Therapeutics：CPTX2309在非人靈長類動物中展現(xiàn)顯著記憶B細胞清除能力及B細胞穩(wěn)態(tài)恢復(fù)效果，目前已進入健康受試者I期安全性研究。

3.Immorna：JCXH-213可向T細胞、NK細胞及巨噬細胞同步遞送CAR mRNA，實現(xiàn)多免疫細胞協(xié)同抗腫瘤，首例受試者已完成給藥，彰顯多效應(yīng)細胞聯(lián)合工程化潛力。

4.深圳MagicRNA：HN2301（靶向CD8的LNP-CD19 CAR mRNA產(chǎn)品）在難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中耐受性良好，可顯著降低疾病活動度，且無高等級CRS或ICANS，為該技術(shù)在自身免疫疾病領(lǐng)域的臨床應(yīng)用提供關(guān)鍵證據(jù)。

此外，Orna、賽諾菲（Sanofi）等多家企業(yè)亦在推進LNP或LNP/VLP平臺，靶向CD19、BCMA、GPC3等多種抗原，覆蓋三大疾病領(lǐng)域，進一步印證了該技術(shù)平臺的廣泛可擴展性。

四、未來展望：開啟免疫治療新篇章

體內(nèi) CAR-T 技術(shù)是免疫治療發(fā)展的關(guān)鍵轉(zhuǎn)折點，標(biāo)志著該領(lǐng)域正從高度個體化向廣泛可及、從復(fù)雜工藝向簡化流程、從?？苹瘧?yīng)用向多適應(yīng)證擴展轉(zhuǎn)型。相較于傳統(tǒng)體外 CAR-T，其不僅降低成本、提升可及性，更為腫瘤、自身免疫及感染性疾病等提供了精準干預(yù)新工具。

盡管遞送效率、劑量優(yōu)化和藥代動力學(xué)仍是核心挑戰(zhàn)，但隨著病毒與非病毒平臺技術(shù)的持續(xù)迭代，這些障礙有望逐步克服。未來，體內(nèi) CAR-T 在腫瘤學(xué)及自身免疫疾病領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，將為患者提供更安全、高效且可及的個性化免疫治療方案。

參考文獻：

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[2] Bot A, Scharenberg A, et al. In vivo chimeric antigen receptor (CAR)?T cell therapy. Nat Rev Drug Discov. 2025 Sep 30:online ahead of print. doi:10.1038/s41573-025-01291-5.

[3] Xu J, Chen Z, et al. In vivo CAR cell therapy: from bench to bedside. J Hematol Oncol. 2025;18:105. doi:10.1186/s13045-025-01759-2.

[4] Rurik JG, Tombácz I, et al. CAR T cells produced in vivo to treat cardiac injury. Science. 2022;375(6576):91–96. doi:10.1126/science.abm0594.

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