足底熱刺痛實驗（Plantar Test / Hargreaves Test）是一種廣泛用于評估嚙齒類動物熱痛敏感性的行為學(xué)方法，特別適用于檢測外周炎癥性或神經(jīng)病理性疼痛模型中的痛覺過敏以及鎮(zhèn)痛藥物的療效。

Fig1 相關(guān)測試設(shè)備，上海欣軟

實驗原理

利用聚焦的紅外熱輻射照射小鼠或大鼠后足底皮膚，引發(fā)傷害性熱刺激。動物因感受到灼痛而迅速抬腳或舔爪，該縮足潛伏期（Paw Withdrawal Latency, PWL）被自動記錄。

潛伏期越短 → 熱痛敏感性越高（痛覺過敏）；

潛伏期延長 → 鎮(zhèn)痛效應(yīng)或感覺減退。

實驗步驟

適應(yīng)階段

將動物置于透明有機(jī)玻璃籠中（底部為玻璃板），置于22–25℃安靜環(huán)境中，使其適應(yīng)測試環(huán)境，減少應(yīng)激干擾。實驗應(yīng)在安靜、無干擾的環(huán)境中進(jìn)行，以避免噪音或震動引起動物焦慮或僵直，從而影響結(jié)果。所用設(shè)備包括控制器（用于調(diào)節(jié)紅外強(qiáng)度、顯示反應(yīng)時間）、發(fā)射/檢測單元（通過光纖連接控制器，發(fā)射紅外光并檢測足部運(yùn)動）、帶框玻璃板（需保持清潔，任何尿液、糞便或污漬都必須立即清除，因其會影響熱傳導(dǎo)性能）以及適用于大鼠（最多6只）或小鼠（最多12只）的動物測試箱。

實驗前，動物需進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練：在實驗開始前至少一周內(nèi)，每天將動物輕柔轉(zhuǎn)移至測試箱中靜置30–60分鐘，使其熟悉環(huán)境并采集基線數(shù)據(jù)；在此期間可放置少量蔗糖或食物顆粒（約5–10粒）以幫助動物鎮(zhèn)靜。不同品系活動水平差異顯著：大鼠中，Lewis品系較溫順但易睡著導(dǎo)致反應(yīng)延遲，Lister-Hooded品系過于活躍可能干擾測試，而Sprague Dawley品系活動適中，是理想選擇；小鼠中C57BL/6比BALB/c更活躍，但只要充分適應(yīng)，任何品系均可使用。正式測試時，先將動物轉(zhuǎn)移至測試箱中適應(yīng)15–20分鐘直至安靜（若睡著可輕敲箱體喚醒），然后根據(jù)預(yù)實驗設(shè)定合適的紅外強(qiáng)度（如成年雄性Lewis大鼠常用48單位），將發(fā)射/檢測單元精準(zhǔn)對準(zhǔn)待測足底中心正下方（利用容器上的定位線輔助，并確保足底平整貼合玻璃板，否則結(jié)果無效）。按下START鍵后，紅外燈與計時器同步啟動；當(dāng)動物因熱痛縮回足部時，系統(tǒng)自動關(guān)閉紅外燈并停止計時。有效反應(yīng)通常伴隨舔舐或查看足部，而自主移動不視為有效反應(yīng)，該次數(shù)據(jù)應(yīng)剔除。反應(yīng)時間需記錄，且建議設(shè)置最大截止時間為20秒以防止?fàn)C傷。每只足至少重復(fù)測試3次（若時間允許建議5次，可剔除最高和最低值后取平均），每次間隔不少于5分鐘（期間可測試其他動物）。

測試結(jié)束后輕柔將動物送回飼養(yǎng)室，并徹底清潔測試箱和玻璃板（使用70%乙醇等消毒液去除氣味、尿液或糞便）。如需多時間點采樣，可在后續(xù)時間點重復(fù)上述步驟。

關(guān)鍵注意事項

避免燙傷：必須設(shè)置安全截止時間（通常15–20秒）；

控制環(huán)境溫度：室溫波動會影響結(jié)果；

盲法操作：實驗者不知分組信息，減少主觀偏差；

左右足交替測試：防止局部敏化影響；

剔除異常值：如動物在無刺激時頻繁甩腳，可能提示自發(fā)痛或焦慮。

總結(jié)

該方法具有非侵入性、高靈敏度和良好重復(fù)性，廣泛應(yīng)用于炎癥性或神經(jīng)病理性疼痛模型中的痛覺過敏評估及鎮(zhèn)痛藥物療效驗證。

實驗過程中，操作者必須密切觀察動物，確保其縮回足部的行為是對熱刺激的反應(yīng)，而非自主移動。若動物因隨意活動而抬腳，則該次試驗應(yīng)視為無效，因為所觀察到的“縮足反應(yīng)”很可能并非由熱痛引起。需要注意的是，Hargreaves 設(shè)備本身無法區(qū)分足部運(yùn)動是由熱刺激引發(fā)還是出于自主行為。典型的熱痛誘發(fā)縮足反應(yīng)通常會伴隨動物查看或舔舐受刺激的足部。

接受 Hargreaves 測試的動物可能因?qū)嶒炋幚恚ㄈ缱⑸渲峦疵粑镔|(zhì)）而對熱痛高度敏感，也可能因先前接受過外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷而痛覺減退。對于痛覺減退的動物，必須設(shè)定一個安全截止時間以防止因未能及時縮足而導(dǎo)致燙傷。

文獻(xiàn)引用：

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