在疾病確定的情況下，選表型、定基因是課題展開的基礎(chǔ)。靶基因的獲取是研究的開始。除了做二代測(cè)序和單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序外，CRISPR文庫(kù)篩選是更常用的策略。而且，與其他篩選手段相比，文庫(kù)篩選體系性價(jià)比更高、特異性更高、與表型關(guān)系更確切。自從2012年體外編輯以來(lái)，文庫(kù)篩選已經(jīng)發(fā)表不少頂刊論文。

MHC-I類分子參與腫瘤抗原遞呈，是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵。在腫瘤免疫領(lǐng)域，PCSK9調(diào)控MHC-I類分子的研究備受關(guān)注，而且在臨床上有降血脂、抗腫瘤的雙重作用，是極有前景的靶點(diǎn)。

2023年8月，紐約大學(xué)格羅斯曼醫(yī)學(xué)院王俊教授、Iannis Aifantis教授在Cell期刊發(fā)表題為A membrane-associated MHC-I inhibitory axis for cancer immune evasion的論文。為了系統(tǒng)地研究調(diào)控MHC-I類分子的關(guān)鍵基因，研究人員使用特定的MHC-I抗原肽展開CRISPR-Cas9篩選。

急性髓系白血病 (AML)細(xì)胞起源于可以分化為抗原遞呈細(xì)胞的髓系細(xì)胞，在這些細(xì)胞系上發(fā)現(xiàn)的抗原遞呈機(jī)制很有可能存在于其他腫瘤類型。在篩選過(guò)程中，研究人員發(fā)現(xiàn)排名靠前的負(fù)調(diào)節(jié)因子包括表面蛋白sushi domain containing 6 (SUSD6)，跨膜蛋白127 (TMEM127)，以及E3泛素連接酶WWP2。其中，TMEM127為四次跨膜蛋白，與神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤易感相關(guān)，也被認(rèn)為是一種Nedd4家族E3連接酶適配器，在沙門氏菌效應(yīng)蛋白SteD存在下降解MHC II。SUSD6為單次跨膜蛋白，其免疫相關(guān)功能未見報(bào)道。

研究發(fā)現(xiàn)，在SUSD6缺失時(shí)，細(xì)胞膜表面MHC-I的表達(dá)會(huì)增強(qiáng)，促進(jìn)急性髓系白血?。ˋML)和實(shí)體瘤中 T 細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫。在小鼠AML模型中，SUSD6缺失顯著延緩了白血病腫瘤的生長(zhǎng)，延長(zhǎng)了小鼠生存期，而且這種抗腫瘤活性主要依賴于CD8+ T 細(xì)胞。而且，在多種實(shí)體腫瘤細(xì)胞系中，SUSD6敲除顯示出類似的結(jié)果。

生信數(shù)據(jù)挖掘發(fā)現(xiàn)，SUSD6在多種腫瘤中高表達(dá)，并且其表達(dá)程度與患者生存率負(fù)相關(guān)。SUSD6表達(dá)還與腫瘤微環(huán)境的 T 細(xì)胞激活特征負(fù)相關(guān)，提示SUSD6是一個(gè)具有臨床價(jià)值的新型免疫調(diào)節(jié)分子，其中用到GEPIA做差異分析！

機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，SUSD6敲除不影響MHC-I的轉(zhuǎn)錄和翻譯，但MHC-I蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。因此，作者猜測(cè)SUSD6參與調(diào)節(jié)MHC-I降解。實(shí)驗(yàn)證明，SUSD6促進(jìn)細(xì)胞表面MHC-I進(jìn)入溶酶體降解，但不影響MHC-I的胞內(nèi)貯存和再循環(huán)。

SUSD6和TMEM127兩個(gè)膜分子可以同時(shí)與MHC-I直接相互作用，并招募E3泛素連接酶WWP2，從而形成一個(gè)四元復(fù)合物。WWP2在SUSD6和TMEM127存在的情況下介導(dǎo)了MHC-I泛素化以及溶酶體降解，從而降低MHC-I在細(xì)胞表面表達(dá)。

另外，通過(guò)敲除四元復(fù)合物中另一個(gè)重要分子，TMEM127，發(fā)現(xiàn)得到的表型與敲除SUSD6類似，從而揭示了靶向四元復(fù)合物分子進(jìn)行抗腫瘤免疫治療的可能性。需要注意，雖熱SUSD6和TMEM127可與MHC-I類分子直接相互作用，但是并不參與MHC-I類分子降解。因此，只有在SUSD6、TMEM127和WWP2均表達(dá)的情況下，MHC-I類分子才會(huì)發(fā)生降解，上述三種分子在腫瘤中的表達(dá)具有普遍性嗎？這是個(gè)問(wèn)題！

因此，比較而言，個(gè)人認(rèn)為PCSK9的臨床應(yīng)用價(jià)值更大。但是，這篇文章的篩選策略和流程是值得我們學(xué)習(xí)和借鑒的。見賢思齊，取其長(zhǎng)處，把這篇文獻(xiàn)推薦給大家！