嗜肺軍團菌檢測試劑盒酶聯(lián)免疫法

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：嗜肺軍團菌IgG檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

編制：深圳市恒昊生物科技有限公司

【預期用途】

本試劑盒可用于定性檢測人血清或血漿（檸檬酸鹽、肝素）中抗嗜肺軍團菌的IgG類抗體。

【前言簡介】

軍團菌是某些原生動物的需氧革蘭氏陰性兼性胞內寄生蟲。它們存在于世界各地的淡水環(huán)境中，可引起人類呼吸道疾?。ㄜ妶F?。?。軍團菌是在費城一家酒店的1976年美國退伍軍人大會代表們爆發(fā)肺炎后首次發(fā)現(xiàn)的。軍團菌屬目前至少有50個物種，包括70個不同的血清群。軍團菌的一種，嗜肺乳桿菌，是大約90%的軍團病病例的病原體，血清組1(Sg1)約占這些病例的84%。嗜肺軍團菌在25~42°C的溫度下繁殖，最適生長溫度為35°C。軍團菌在環(huán)境中的溫暖、死水和人工系統(tǒng)中生長，如冷卻塔、蒸發(fā)冷凝器、冷熱水系統(tǒng)和模擬生物生長的自然環(huán)境的溫泉池。這些系統(tǒng)還提供了產(chǎn)生氣溶膠/液滴和生物體分散到大氣中的方法。軍團病可通過吸入含有軍團菌的氣溶膠或微吸被軍團菌污染的攝入水而獲得。人與人之間的傳播被認為不是一種風險。感染軍團病的可能性取決于水源中的污染程度、暴露者的易感性和暴露者的強度。軍團病的特征是一種“機會性”疾病，攻擊患有潛在疾病或免疫系統(tǒng)薄弱的人。易感風險包括年齡增長、男性、嚴重吸煙、酗酒、慢性肺部疾病、免疫抑制治療、癌癥化療、器官或骨髓移植和皮質類固醇治療。軍團菌病可出現(xiàn)在兩種不同的臨床表現(xiàn)中：肺炎軍團菌?。ㄜ妶F?。瑵摲诩s為。2-10天（可延長至16-20天）和龐提亞克熱（潛伏期：通常為12-48小時）。軍團菌肺炎（軍團?。┦且环N嚴重的肺炎，其病死率為10-15%。軍團病患者最初表現(xiàn)為咳嗽、發(fā)燒和非特異性癥狀，包括不適、肌痛和頭痛。一些患者會出現(xiàn)顫抖、寒戰(zhàn)、胸痛、腹瀉、精神錯亂或其他神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。肺外受累是罕見的。龐提亞克熱是一種較輕的疾病，無肺炎的表現(xiàn)，表現(xiàn)為一種流感樣疾病。癥狀可能包括頭痛、寒戰(zhàn)、肌肉疼痛、干咳和發(fā)燒。它通常是自限性的，通常不需要治療。發(fā)作率遠高于軍團病患者（高達95%）。

咳嗽、發(fā)熱和非特異性癥狀（不適、肌痛、頭痛)。一些患者會出現(xiàn)寒顫、胸痛、腹瀉、精神錯亂或其他神經(jīng)系統(tǒng)癥狀

流感樣疾病（頭痛、寒戰(zhàn)、肌肉疼痛、干咳和發(fā)燒），無肺炎表現(xiàn)

吸入含有軍團菌的氣溶膠或微滴吸入被軍團菌污染的水

【檢測原理】

特異性抗體的定性免疫酶學測定是基于ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）技術。微孔板上包被特定的抗原，以結合樣品的相應抗體。洗滌微孔以去除所有未結合的樣品材料后，添加酶聯(lián)物，與捕獲的抗體結合。在第二個洗滌步驟中，未結合的共軛物被去除。通過加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物，得到藍色反應產(chǎn)物，可以觀察到結合結合物形成的免疫復合物。該產(chǎn)品的強度與樣品中特異性抗體的數(shù)量成正比。加入終止液以終止反應，藍色變成了黃色。使用酶標儀器讀取450/620nm處的吸光度。

【試劑盒組成】

1）微孔板12x8

2）樣品稀釋液1×100ml，pH 7.2 ± 0.2，即用型

3）終止液1×15ml，即用型

4）洗滌濃縮液20倍濃縮，1×50ml，pH 7.2 ± 0.2

5）酶聯(lián)物1×20ml，即用型

6）底物液1×15ml，即用型

7）陽性質控1×2ml，即用型

8）臨界質控1×3ml，即用型

9）陰性質控1×2ml，即用型

10）封板紙1x

11）使用說明書1x

12）布局表1x

【所需的材料和設備】（未提供）

1）酶標儀

2）37℃培養(yǎng)箱

3）手動或自動洗板裝置

4）移液器：10-1000μL

5）渦旋混合器

6）蒸餾水

7）一次性試管

【儲存條件】

試劑盒必須儲存于2-8℃的環(huán)境中，打開的試劑在標簽上規(guī)定的有效期內是穩(wěn)定的。

【試劑準備】

將所有的試劑和樣品平衡至室溫(20-25°C)，并在開始測試運行前進行混合是非常重要的！

洗滌液

用蒸餾水根據(jù)1+19稀釋洗滌濃縮液，例如，10 mL洗滌濃縮液+190mL蒸餾水混合。稀釋的洗滌液在室溫下（20-25℃）可保存5天，如果在濃縮液中出現(xiàn)晶體，則將溶液加熱至37°C，例如在水浴中。稀釋前攪拌均勻。

底物液

試劑為即用型，不需要稀釋。必須儲存在2-8°C，避光。溶液應該是無色的，或者可以有一個輕微的藍色色調。如果基質變成藍色，它可能已經(jīng)被污染了，應該被扔掉。

【樣品采集和制備】

使用人血清或血漿（檸檬酸、肝素）樣品。如果在樣品采集后5天內進行檢測，樣品應保持在2-8°C；否則應分裝并深度冷凍保存(-70至-20°C)。如果樣品是冷凍保存的，在檢測前將解凍的樣品混合。避免反復凍結和解凍。不建議對樣品進行熱失活。

樣品稀釋

檢測前，所有樣品應用IgG樣品稀釋緩沖液稀釋1+100。將10μL樣品和1 mL IgG樣品稀釋緩沖液加入試管中，渦旋混勻。

檢測步驟

1）加100μL標準品或質控品和稀釋的樣品至相應的微孔中，保留A1為空白對照。

2）用提供的封板紙封板。

3）37± 1 °C孵育1小時± 5 分鐘。

4）棄掉微孔中的內容物，用稀釋的洗滌液沖洗孔3次(每次每孔300μL)。洗滌和吸入的時間間隔應>5s。在吸收性紙上用力擊打微孔板，以去除殘留的液滴。

5）加100μL酶聯(lián)物至每個微孔中，除了空白孔。

6）室溫下（20-25℃）避光孵育30分鐘。

7）重復步驟4。

8）加100μL底物液至每個微孔中。

9）在黑暗環(huán)境中室溫下孵育15分鐘。

10）加100μL終止液至每個微孔中。

11）在加入終止液后的30分鐘內，用酶標儀讀取在450/620nm處的吸光度

【結果】

運行驗證標準：

為了使試驗運行有效，必須嚴格遵守這些使用說明，并必須滿足以下標準：

空白對照：吸光度值<0.100

陰性質控：吸光度值<0.200和<臨界值

臨界質控：吸光度值0.150-1.300

陽性質控：吸光度值>臨界值

如果不滿足這些標準，則該檢測無效，必須重復檢測。

結果計算：

臨界值是雙孔臨界質控吸光度的平均值。

例如，臨界質控吸光度0.44+臨界質控吸光度0.42=0.86/2=0.43

臨界值=0.43

結果單位[NTU]

樣品平均吸光度x10/臨界值=NTU

例如，1.591x10/0.43=37 NTU