秋冬時(shí)節(jié)流感進(jìn)入高發(fā)期，而現(xiàn)有防控手段仍存在諸多局限：疫苗需提前數(shù)周接種方能生效，小分子特效藥也必須在感染后 48 小時(shí)內(nèi)使用才有效。對(duì)于免疫低下人群或未能及時(shí)接種疫苗者，這些限制使其持續(xù)暴露于高風(fēng)險(xiǎn)之中。因此，當(dāng)前迫切需要一種兼具 “ 防與治 ” 功能、起效迅速且保護(hù)持久的新型抗流感方案。近日，《 PNAS 》（美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊）發(fā)表了一項(xiàng)重磅研究，來自波士頓兒童醫(yī)院、哈佛醫(yī)學(xué)院等機(jī)構(gòu)的團(tuán)隊(duì)研發(fā)出一款新型納米抗體藥物偶聯(lián)物 ——VHHκ-Zan?，僅需鼻內(nèi)給藥，就能實(shí)現(xiàn) “ 治療 + 預(yù)防 ” 雙重功效，感染后 3 天給藥仍能 100% 保護(hù)小鼠存活，提前 2 周預(yù)防給藥更是全程守護(hù)，徹底打破現(xiàn)有流感防治的諸多限制！

扎那米韋（Zanamivir）是臨床常用的流感特效藥，作用是抑制流感病毒表面的神經(jīng)氨酸酶（NA），阻止新生成的病毒從感染細(xì)胞中釋放，從而阻斷傳播。但它有個(gè)致命缺點(diǎn)：分子小、代謝快，需要反復(fù)高劑量給藥才能起效。

研究團(tuán)隊(duì)的巧思的是：把1 個(gè) VHHκ 納米抗體，與 4 個(gè)扎那米韋分子通過柔性 linker 共價(jià)偶聯(lián)，打造出 “多價(jià)版” 偶聯(lián)物 VHHκ-Zan?。對(duì)比 1 個(gè)、2 個(gè)扎那米韋的偶聯(lián)物，4 個(gè)扎那米韋的設(shè)計(jì)能實(shí)現(xiàn) “雙重增益”：既增強(qiáng)對(duì)病毒 NA 的結(jié)合力（多價(jià)結(jié)合更牢固），又能招募更多免疫細(xì)胞清除感染細(xì)胞。

圖中展示流感病毒神經(jīng)氨酸酶（ NA ）的結(jié)構(gòu)（紅色部分是活性位點(diǎn)），金色是結(jié)合了 zanamivir 的 NA 單體，綠色是 zanamivir ；右側(cè)對(duì)比了唾液酸和 zanamivir 的結(jié)構(gòu) — 兩者高度相似，這也是 zanamivir 能精準(zhǔn)結(jié)合 NA 、阻止病毒釋放的關(guān)鍵。同時(shí)展示了如何與 VHHκ 納米抗體結(jié)合：左側(cè)是能偶聯(lián) 2 個(gè) zanamivir 的連接體設(shè)計(jì)，右側(cè)是偶聯(lián) 4 個(gè) zanamivir 的連接體設(shè)計(jì)，通過疊氮基（ N ? ）和 DBCO 基團(tuán)的 ” ，實(shí)現(xiàn) zanamivir 與 VHHκ 的精準(zhǔn)、穩(wěn)定連接。結(jié)果顯示： VHHκ-Zan ? （ 4 個(gè) zanamivir ）的抑制能力最強(qiáng)， VHHκ-Zan ? 次之， VHHκ-Zan （ 1 個(gè) zanamivir ）最弱，且都能有效抑制兩種流感病毒。用生物層干涉技術(shù)（ BLI ）檢測(cè)偶聯(lián)物與 NA 的結(jié)合親和力。結(jié)果顯示： VHHκ-Zan ? 的解離常數(shù)（ Kd=3.5nM ）遠(yuǎn)低于 VHHκ-Zan （ Kd=11nM ），證明 4 個(gè) zanamivir 的設(shè)計(jì)讓偶聯(lián)物與病毒 NA 的結(jié)合力提升了 3 倍多。

給小鼠注射 15×LD ?? 的致死劑量流感病毒（ PR/8 ），之后分別鼻內(nèi)給藥不同劑量的偶聯(lián)物、 zanamivir ，或不給藥（對(duì)照組），監(jiān)測(cè)體重變化和存活情況， 28 天后收集血清檢測(cè)抗體。結(jié)果顯示： 0.3mg/kg 劑量的 VHHκ-Zan ? 能讓 100% 小鼠存活； VHHκ-Zan ? 保護(hù)率 70% ； VHHκ-Zan 僅 40% ；而傳統(tǒng) zanamivir 需要高劑量才勉強(qiáng)起效，直觀證明 VHHκ-Zan ? 的治療效果遠(yuǎn)超其他版本。感染后 5 天小鼠肺部病毒滴度： VHHκ-Zan ? 和 VHHκ-Zan ? 處理組的肺部病毒滴度顯著低于對(duì)照組，且劑量越高清除效果越強(qiáng)；而游離 zanamivir 組雖然能讓部分小鼠存活，但無法有效清除肺部病毒。

VHHκ-Zan ? 特異性 IgG 、 IgA 抗體及中和抗體水平，血清中針對(duì)完整 IAV 、 HA 蛋白、 NP 蛋白的 IgG 抗體滴度，各組間無顯著差異。VHHκ–Zan?組IgA顯著升高，提示黏膜免疫增強(qiáng)。且在血清與肺勻漿中的中和抗體滴度。 VHHκ–Zan ? 組中和活性顯著高于對(duì)照組。鼻腔灌洗液與鼻相關(guān)淋巴組織（ NALT ）中針對(duì) NP 和 HA 的 IgA 抗體水平。 VHHκ–Zan ? 組在呼吸道黏膜中抗體反應(yīng)更強(qiáng)。

給小鼠注射致死劑量流感病毒（ Cal/09 ），分別在感染后 3 天、 4 天鼻內(nèi)給藥不同劑量的 VHHκ-Zan ? ，監(jiān)測(cè)體重變化、存活情況， 5 天后檢測(cè)肺部病毒滴度。感染后 5 天肺部病毒滴度：結(jié)果顯示，即使感染后 3 天、 4 天給藥， VHHκ-Zan ? 仍能顯著降低肺部病毒數(shù)量；尤其是感染后 3 天給藥組，病毒滴度接近檢測(cè)下限（ LOD ），說明能快速清除已復(fù)制的病毒。 體重變化曲線：感染后 3 天給藥的小鼠，體重下降幅度小且快速恢復(fù)；而 4 天給藥組體重下降更明顯，證明治療越及時(shí)，效果越好，但即使延遲到 3 天仍能保護(hù)小鼠。感染后 3 天給藥（ 1mg/kg 或 2mg/kg ）， 100% 小鼠存活；感染后 4 天給藥（ 2mg/kg ），仍能保護(hù) 25% 的小鼠，這一發(fā)現(xiàn)打破了傳統(tǒng)流感藥 “48 小時(shí)內(nèi)給藥 ” 的限制，大大拓寬了治療窗口。

給小鼠鼻內(nèi)注射不同劑量的 VHHκ-Zan?，分別提前2周、4周注射致死劑量流感病毒（PR/8），監(jiān)測(cè)存活情況；生存曲線：提前2周給藥，無論1mg/kg還是2mg/kg，100%小鼠存活；提前4周給藥，2mg/kg劑量仍能保護(hù)80% 的小鼠，1mg/kg劑量則無法有效保護(hù)。 血清中IgG抗體滴度：結(jié)果顯示，預(yù)防性給藥組與對(duì)照組的血清 IgG 水平?jīng)]有顯著差異，說明長(zhǎng)效保護(hù)不是來自血清 IgG的提升。肺勻漿中的IgA抗體滴度：提前2周給藥組的肺組織IgA水平顯著高于對(duì)照組，尤其是針對(duì)NP蛋白的IgA提升明顯，證明預(yù)防性給藥能在肺部提前激活黏膜免疫。中和抗體滴度：提前2周給藥組的中和抗體水平顯著更高，且肺組織中的中和活性更強(qiáng)，提示提前在呼吸道建立 “抗病毒防線”，病毒入侵時(shí)能快速響應(yīng)。

研究聚焦上呼吸道黏膜免疫，比較預(yù)防性給藥后鼻腔局部的抗體變化：鼻腔沖洗液中的IgA抗體滴度：結(jié)果顯示：提前2周、4周給藥VHHκ-Zan?的小鼠，鼻腔沖洗液中針對(duì)NP蛋白、HA蛋白的IgA水平，均顯著高于對(duì)照組和游離 zanamivir 組，且提前 2 周給藥的效果更明顯。鼻相關(guān)淋巴組織（NALT）中的IgA抗體滴度：NALT是呼吸道黏膜免疫的 “核心淋巴組織”，這里的 IgA 水平直接反映局部免疫激活程度。結(jié)果與鼻腔沖洗液一致，VHHκ-Zan?預(yù)防性給藥后，NALT 中的 IgA 抗體顯著升高，證明提前鼻內(nèi)給藥能精準(zhǔn)激活上呼吸道黏膜免疫，讓鼻腔、咽喉等流感病毒 “入侵門戶” 提前具備防御能力。

該研究亮點(diǎn)：

1.藥物組合創(chuàng)新：將能識(shí)別免疫球蛋白輕鏈的納米抗體（VHHκ）與流感神經(jīng)氨酸酶抑制劑扎那米韋偶聯(lián)，形成“多價(jià)偶聯(lián)物”。

2.多價(jià)增強(qiáng)效果：一個(gè)納米抗體上連接4個(gè)扎那米韋分子（VHHκ-Zan?），比連接1個(gè)的版本效果強(qiáng)10倍！

3.鼻腔給藥即可：無需注射，噴霧入鼻就能在呼吸道形成高效保護(hù)。

4.長(zhǎng)效保護(hù)：一次給藥，預(yù)防效果可持續(xù)至少2周，甚至在感染后第3天用藥仍能救命。

5.雙重機(jī)制：既直接抑制病毒釋放，又通過抗體依賴的細(xì)胞殺傷作用（ADCC/CDC）清除感染細(xì)胞。

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/41183201/

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