摘要

抗體偶聯(lián)藥物(antibody-drug conjugate, ADC)是將小分子藥物(payload)通過化學(xué)連接子(linker)偶聯(lián)到單克隆抗體上形成的靶向藥物。近年來, ADC研發(fā)蓬勃發(fā)展, 全球已有10余款A(yù)DC獲批上市。隨著技術(shù)進步, 新一代ADC呈現(xiàn)出更加復(fù)雜的設(shè)計趨勢, 如在同一抗體分子上偶聯(lián)2種不同的載荷(即雙載荷ADC)。雙載荷ADC有望通過一次給藥同時遞送2種有效載荷, 增強對異質(zhì)性腫瘤的殺傷并克服耐藥。然而, 這類ADC因結(jié)構(gòu)復(fù)雜、均一性/雜質(zhì)控制難度高, 給藥學(xué)研究與監(jiān)管審評帶來新的挑戰(zhàn)。本文探討雙載荷ADC研發(fā)進展和藥學(xué)審評關(guān)注點, 包括生產(chǎn)用原材料、生產(chǎn)工藝、結(jié)構(gòu)表征與雜質(zhì)研究、分析方法、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究等方面, 結(jié)合實際申報中發(fā)現(xiàn)的藥學(xué)研究缺陷, 探討雙載荷ADC產(chǎn)品的研發(fā)進展和藥學(xué)審評考慮, 旨在為該類產(chǎn)品的開發(fā)和藥學(xué)研究提供實用參考。

正文

抗體偶聯(lián)藥物(antibody-drug conjugate, ADC)是將單克隆抗體的高度靶向性與小分子細胞毒素的強效殺傷作用相結(jié)合, 從而實現(xiàn)對腫瘤細胞的定向消除。自2000年首款A(yù)DC藥物獲批以來, 隨著技術(shù)的不斷發(fā)展和累積, 從2020年開始ADC領(lǐng)域呈現(xiàn)爆發(fā)式增長趨勢, 新一代ADC在連接子穩(wěn)定性、藥效和安全性上均有顯著改進。目前全球已有超過15款A(yù)DC上市, 用于乳腺癌、淋巴瘤等多種腫瘤的治療。在我國, ADC研發(fā)亦方興未艾, 已有多款本土研發(fā)的ADC獲得上市許可, 進入臨床研究階段的ADC數(shù)量也呈穩(wěn)定增長趨勢。從分子結(jié)構(gòu)上看, 除傳統(tǒng)的單一載荷ADC外, 還包括在同一抗體分子上偶聯(lián)2種不同的載荷(即雙載荷ADC)。相較于單一載荷ADC, 雙載荷ADC在藥效方面存在一定潛在優(yōu)勢, 例如: 研究顯示將2種不同作用機制的細胞毒性藥物結(jié)合于同一ADC, 可同時作用于腫瘤細胞, 從而克服單一藥物可能引發(fā)的耐藥并提高療效。還有研究嘗試在ADC上同時偶聯(lián)細胞毒性藥物和免疫激活劑, 實現(xiàn)“化療+免疫”雙重打擊, 這類“雙彈頭”ADC有望在對抗腫瘤耐藥和異質(zhì)性方面通過其特有的多種小分子間協(xié)同或正交作用發(fā)揮獨特優(yōu)勢。此外, 對于同樣含有2種以上小分子的其他治療策略, 如聯(lián)合化療、單一載荷ADC聯(lián)合化療、2種單一載荷ADC聯(lián)合等, 其將在相對一致的時間和空間上發(fā)揮各自功能, 腫瘤細胞攝入2種載荷的比例相對可控, 以上特點可能對藥物的臨床安全性、有效性產(chǎn)生積極影響。但與此同時, 雙載荷ADC復(fù)雜的結(jié)構(gòu)異質(zhì)性也對藥物的上游構(gòu)建、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量表征與控制等研究提出了更高要求。

目前, 全球雙載荷ADC研發(fā)仍處于起步階段, 尚無上市產(chǎn)品, 但若干候選藥物已進入臨床研究。截至2025年5月, 我國監(jiān)管機構(gòu)已批準2款雙載荷ADC的新藥臨床試驗申請(investigational new drug, IND), 這也是全球最早獲準開展人體臨床試驗的2款藥物。為更好地指導(dǎo)研發(fā), 國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心于2024年發(fā)布了《抗體偶聯(lián)藥物藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則》(以下簡稱“指導(dǎo)原則”), 對ADC的藥學(xué)研究提出了相關(guān)要求, 其中對雙載荷ADC的偶聯(lián)工藝、過程控制、載藥分布和電荷異構(gòu)性表征等方面進行了明確。由于雙載荷ADC的藥學(xué)開發(fā)及相關(guān)研究與單載荷ADC有部分重疊, 本文僅對雙載荷ADC特有的藥學(xué)研究考慮進行詳細討論, 包括生產(chǎn)用原材料、結(jié)構(gòu)表征、分析方法、雜質(zhì)研究、穩(wěn)定性研究、關(guān)鍵質(zhì)量屬性控制等, 相同部分不再贅述, 以期為該類藥物的研發(fā)提供幫助。

1

生產(chǎn)用原材料(裸抗及小分子)

2種載荷的選擇是雙載荷ADC作用機制的重要基礎(chǔ)和設(shè)計重點。目前, ADC產(chǎn)品主要應(yīng)用的載荷種類見表1。

雙載荷ADC的載荷選擇可采用正交策略(如遞送2種不同機制的載荷)或協(xié)同策略(如A藥物可增強B藥物的抗腫瘤活性)。對于正交策略, 載藥組合設(shè)計為RNA聚合酶抑制劑+拓撲異構(gòu)酶抑制劑, 在DNA/RNA水平以2種互補的腫瘤殺傷機制克服腫瘤內(nèi)細胞的異質(zhì)性和耐藥性。此外, 也可選擇微管蛋白抑制劑+TLR激動劑, 形成“化療+免疫”一體化的靶向藥物, 迅速減少腫瘤負荷, 并重編程腫瘤微環(huán)境, 招募和激活免疫細胞攻擊殘余腫瘤細胞。對于協(xié)同策略, 載藥組合一般設(shè)計為在同一作用通路上的2種載荷, 包括拓撲異構(gòu)酶抑制劑+DNA損傷應(yīng)答抑制劑(如PARP抑制劑), 2種載荷均靶向腫瘤細胞的DNA損傷修復(fù)機制, 在同一通路的不同節(jié)點發(fā)揮作用, 有助于增強腫瘤細胞對拓撲異構(gòu)酶抑制劑的敏感性。

連接子方面, 除分枝連接子外, 其他與單載荷ADC基本一致, 可分為可裂解連接子和不可裂解連接子。雙載荷ADC的2種載荷可能在不同的細胞定位(細胞內(nèi)/微環(huán)境)或不同釋放條件下發(fā)揮作用, 但卻依賴于同一個抗體分子所帶來的“制導(dǎo)作用”, 因此建議研發(fā)者從整體分子的結(jié)構(gòu)和作用機制綜合考慮, 評估不同載荷對應(yīng)連接子的設(shè)計對ADC分子的疏水性、空間結(jié)構(gòu)、載荷釋放時間及空間等屬性的影響, 確保雙載荷ADC發(fā)揮預(yù)期的作用機制。

裸抗方面, 由于雙載荷ADC生產(chǎn)中一般需要進行2種正交的偶聯(lián)方式, 因此對裸抗進行工程化改造引入額外的偶聯(lián)位點在該類產(chǎn)品中較為常見。涉及裸抗改構(gòu)的偶聯(lián)方式主要包括: 工程化半胱氨酸偶聯(lián)、非天然氨基酸偶聯(lián)、酶介導(dǎo)偶聯(lián)等。建議研發(fā)者在申報資料中詳細提供裸抗的改構(gòu)信息, 并在適當節(jié)點對改構(gòu)結(jié)果進行表征。例如: 涉及引入或替換氨基酸的, 建議在載體構(gòu)建、細胞庫表征、代表性裸抗批次的結(jié)構(gòu)確證等節(jié)點, 采用測序、肽圖等方法在核苷酸/氨基酸水平上對改構(gòu)進行確證性研究。此外, 對于僅在一條輕/重鏈上引入氨基酸突變用于偶聯(lián)的產(chǎn)品(如對于該載荷中ADC單分子的半邊載藥另外半邊不載藥), 盡管未突變鏈在后續(xù)工藝中不會偶聯(lián)對應(yīng)載荷, 而是在載藥分布表征中歸為該載荷的DAR0雜質(zhì), 但考慮到載藥分布表征前可能對樣品進行還原等預(yù)處理, 因此難以代表正常條件下ADC的完整結(jié)構(gòu), 仍不能表征二硫鍵錯配雜質(zhì)的含量(即使該類設(shè)計一般采用knob-into-hole結(jié)構(gòu))。審評建議在裸抗放行階段對二硫鍵錯配雜質(zhì)進行控制, 將有助于增強下游ADC產(chǎn)物的均質(zhì)性; 涉及糖基化修飾改構(gòu)的, 如酶介導(dǎo)的糖鏈修剪、疊氮化反應(yīng)添加偶聯(lián)基團等, 建議在改構(gòu)操作前后設(shè)置過程控制節(jié)點, 對中間產(chǎn)品的N寡糖譜進行監(jiān)測, 關(guān)注改構(gòu)操作的穩(wěn)健性和待偶聯(lián)樣品的批間一致性。

2

生產(chǎn)工藝

雙載荷ADC產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的主要特點為一般涉及2種偶聯(lián)方式。目前, 雙載荷ADC的偶聯(lián)策略主要分為以下2類: 基于小分子的分支連接子策略和基于氨基酸的正交偶聯(lián)策略。基于小分子的分支連接子策略采用具有多個分支的連接子, 將多個藥物分子通過相同偶聯(lián)位點連接到抗體上, 從而提高載藥率(drug-antibody ratio, DAR)。該方法又可細分為2類。①三臂或多臂連接子的其中一條主鏈與抗體結(jié)合, 其他分支通過多步偶聯(lián)工藝進行多種載荷載藥。例如: SEACEN公司設(shè)計了一種含有2種不同保護基團的半胱氨酸偶聯(lián)位點的分支連接子, 其分別在三(2-羧乙基)膦[tris(2-carboxyethyl) phosphine, TCEP]或乙酸汞處理下進行脫保護, 在抗體的鏈間二硫鍵中對分支連接子進行常規(guī)的半胱氨酸偶聯(lián)后, 再進行兩步脫保護-偶聯(lián)反應(yīng)以分別偶聯(lián)2種不同的載荷, 最終形成DAR值為16(8+8)的雙載荷ADC; ②分支載藥單元, 即在連接子合成階段直接負載多種小分子藥物。例如: 瑞士Araris Biotech AC公司通過微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(microbial trans-glutaminase, mTC)將雙載荷-連接子一步偶聯(lián)至抗體Fc段的Q295位點, 最終獲得DAR值為4(2+2)的雙載荷ADC。該策略可實現(xiàn)單步雙載荷偶聯(lián), 提高生產(chǎn)效率, 然而使用此策略的挑戰(zhàn)在于每個載荷組合的分支連接子都需要重新設(shè)計合成, 因此開發(fā)成本較高且靈活性受限。綜上所述, 分支連接子策略本質(zhì)上是雙載荷同偶聯(lián)位點(對抗體分子而言, 兩載荷預(yù)期偶聯(lián)至相同位點)技術(shù), 其主要對小分子部分進行設(shè)計和改構(gòu), 需要注意分枝結(jié)構(gòu)往往增大ADC的疏水性, 必要時可以考慮在連接子中引入疏水屏蔽基團或親水鏈(如PEC)平衡整體水溶性, 以規(guī)避潛在的分子聚集和非特異性吸附等質(zhì)量風險。

基于氨基酸的正交偶聯(lián)策略通過2種正交的偶聯(lián)方法, 即在抗體分子的不同位點分別偶聯(lián)2種載荷。目前, 主流的基于氨基酸的偶聯(lián)方法如下: 鏈間半胱氨酸偶聯(lián)、工程化半胱氨酸偶聯(lián)、工程化非天然氨基酸偶聯(lián)、酶催化偶聯(lián)(如微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶介導(dǎo)的Q295位點定點偶聯(lián)、半乳糖轉(zhuǎn)移酶催化疊氮化反應(yīng)介導(dǎo)的糖鏈偶聯(lián))等。除鏈間/工程化半胱氨酸偶聯(lián)在偶聯(lián)機制上基本一致(但仍可通過關(guān)鍵工藝參數(shù)優(yōu)化完成雙載荷分步偶聯(lián))外, 以上主要使用的偶聯(lián)方法均具有一定特異性, 方法間相互影響較小, 為分步偶聯(lián)不同載荷提供了理論基礎(chǔ)。

工藝開發(fā)方面, 雙載荷ADC復(fù)雜的生產(chǎn)工藝需要進行更加深入和細致的工藝開發(fā)研究。工藝開發(fā)須綜合優(yōu)化2種偶聯(lián)反應(yīng)的條件, 確保均能達到目標偶聯(lián)率, 對工藝參數(shù)研究提出了更深入的要求, 如不同還原度對每種載荷偶聯(lián)的影響、2種載荷偶聯(lián)先后順序的考量等。此外, 由于2種偶聯(lián)反應(yīng)一般是正交的, 在工藝放大過程中2種偶聯(lián)工藝的效率、雜質(zhì)殘留等可能呈現(xiàn)出非線性、不完全協(xié)調(diào)的變化趨勢, 這意味著工藝放大研究不僅需要考慮偶聯(lián)工藝內(nèi)的工藝性能波動, 還應(yīng)綜合考慮偶聯(lián)工藝間的放大協(xié)調(diào)性。建議研發(fā)者基于“質(zhì)量源于設(shè)計”的理念, 綜合考慮2種載荷的載藥分布、偶聯(lián)及偶聯(lián)前處理對產(chǎn)品整體分子的影響、偶聯(lián)產(chǎn)生的產(chǎn)品/工藝相關(guān)雜質(zhì)及所需清除能力、不同偶聯(lián)方式間的相互影響等因素, 合理選擇偶聯(lián)方式、偶聯(lián)順序和后續(xù)純化步驟, 開展工藝開發(fā)研究。

3

質(zhì)量研究和控制

3.1 特性鑒定

3.1.1 DAR值和載藥分布

雙載荷ADC存在多種載藥組合(a+b)形式, 其整體物質(zhì)組成中不僅包括總DAR值不同的ADC分子, 即使在總DAR值相同的分子中還包括2種載荷不同比例的載藥組合, 應(yīng)對不同載荷的偶聯(lián)特性進行分別表征與控制。單載荷ADC的產(chǎn)品經(jīng)驗顯示, 載藥數(shù)量及分布是影響產(chǎn)品安全性和有效性的關(guān)鍵質(zhì)量屬性, 進而可以預(yù)期雙載荷ADC中任一載荷平均載藥數(shù)量或不同載藥組合比例的波動都可能直接影響產(chǎn)品的療效和安全性。因此, 基于偶聯(lián)方式、偶聯(lián)位點、載荷間理化性質(zhì)差異等因素, 選擇適當?shù)姆治龇椒▽AR值和載藥分布進行研究, 對于評估雙載荷ADC產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)均一性、批間質(zhì)量一致性具有重要意義。

對于雙載荷ADC的載藥特性表征, 適當?shù)姆治龇椒☉?yīng)充分利用2種載荷間的理化性質(zhì)差異以區(qū)分不同載荷的載藥情況。目前, 應(yīng)用于單載荷ADC的DAR值檢測分析方法主要有疏水作用色譜(hydrophobic interaction chromatography-high performance liquid chromatography, HIC-HPLC)、反相色譜(reversed-phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)、紫外-可見分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry, UV/Vis)和毛細管凝膠電泳(capillary gel electrophoresis with sodium dodecyl sulfate, CE-SDS)等。其中, UV/Vis法和CE-SDS法的檢測原理分別為通過檢測小分子的吸光度和相對分子質(zhì)量對載荷的載藥情況進行半定量分析。但對于同時檢測2種載荷, 載荷間的吸收光譜和相對分子質(zhì)量差異可能不足以在分析方法的靈敏度內(nèi)有效區(qū)分2種載荷, 即方法的專屬性不能支持分別報告2種載荷的載藥量, 目前申報的雙載荷ADC產(chǎn)品中也未見以此2種分析方法表征DAR值。HIC-HPLC法和RP-HPLC法均為基于疏水性差異以分離不同載藥量ADC分子的分析方法, 但由于2種方法在填料疏水性、樣品處理條件等方面的差異, 對于載藥特性的表征各有側(cè)重。HIC-HPLC法在非變性條件下進行檢測, 可在基本保留產(chǎn)品完整結(jié)構(gòu)的情況下分析其載藥特征, 其局限在于分離分辨率相對較低, 疏水性差異小的峰容易重疊, 在雙載荷ADC的分析中更容易被放大, 載荷間固有的疏水性差異疊加復(fù)雜的載藥數(shù)量組合是否足以在該方法中表現(xiàn)出足夠的峰分離度, 可能需要檢測參數(shù)的持續(xù)優(yōu)化并要求具體案例具體分析。RP-HPLC法是目前雙載荷ADC產(chǎn)品申報中較為常見的載藥特性分析方法, 該方法可將復(fù)雜的載藥組合通過還原處理在單鏈水平上進行載藥分析, 其含有三氟乙酸的流動相, 可以增強峰分離度。需要注意的是, 該方法中較強的還原條件可能造成載荷脫落, 導(dǎo)致DAR值略低于真實值。在雙載荷ADC中還應(yīng)考慮2種連接子-載荷對還原條件的敏感性是否一致, 盡可能優(yōu)化處理條件以準確反映樣品載藥情況。雖然有報道表明優(yōu)化后的RP-HPLC方法可在無須樣品預(yù)處理(還原)的情況下進行載藥分布檢測, 但方法尚不成熟且暫未見業(yè)界應(yīng)用, 常規(guī)RP-HPLC方法的主要局限仍為無法直接在整體ADC分子水平上對載藥分布進行表征, 需要其他方法進行互補分析。LC-MS法為基于相對分子質(zhì)量的分析方法, 對ADC分子進行Lys-C等酶降解后, 通過分析肽段的一級質(zhì)譜和二級碎片離子信息, 對偶聯(lián)位點進行確證, 并根據(jù)偶聯(lián)/未偶聯(lián)肽段的色譜峰面積比例計算單個偶聯(lián)位點占有率。該方法的精度和靈敏度較高, 其肽段水平的分析一般情況下可以在一定程度上規(guī)避2種載荷在整體分析中難以有效區(qū)分的問題, 同時可以通過有無異常峰型相對準確地判斷非預(yù)期偶聯(lián)(如單載荷非預(yù)期位點偶聯(lián)、雙載荷交叉偶聯(lián)等)的發(fā)生。同樣, 高精度伴隨對整體結(jié)構(gòu)反映的不足, 在實際應(yīng)用中, 可以考慮與RP-HPLC聯(lián)用, 基于相對分子質(zhì)量和疏水性對雙載荷ADC產(chǎn)品的載藥情況進行正交表征。此外, 如指導(dǎo)原則所述, 可采用酶解、還原等方式分段降低ADC分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性, 該策略在雙載荷ADC產(chǎn)品中應(yīng)用頻次更高, 建議申請人根據(jù)產(chǎn)品特點選擇合理的預(yù)處理方式以完善載藥特性表征。

3.1.2 生物學(xué)活性

目前, ADC產(chǎn)品的基于作用機制的細胞水平生物學(xué)活性檢測一般采用ADC與表面表達靶抗原的靶細胞共孵育的體外細胞增殖抑制實驗。雙載荷ADC的生物學(xué)活性分析方法及控制策略與單載荷ADC基本一致, 但建議關(guān)注并表征其相較于單載荷ADC的額外作用機制: 是否在特定模型中表現(xiàn)出協(xié)同增效或擴大的細胞殺傷能力。例如, 可分別制備僅偶聯(lián)藥物a或僅偶聯(lián)藥物b的ADC, 與雙載荷ADC平行進行細胞毒性比較。如果雙載荷設(shè)計具有協(xié)同作用, 應(yīng)當體現(xiàn)在雙載荷ADC對某些細胞的殺傷強于任一單載荷ADC; 如果雙載荷設(shè)計具有正交作用, 則能夠殺傷單載荷ADC無效的耐藥靶細胞。實驗時也可考察不同靶抗原表達水平或不同耐藥狀態(tài)的細胞株對雙載荷ADC是否表現(xiàn)出差異化的敏感性, 以驗證其克服耐藥及增強抗腫瘤活性的預(yù)期機制與潛在優(yōu)勢。對于載有免疫激動劑的雙載荷ADC, 除表征其細胞毒性作用直接殺傷腫瘤細胞的活性外, 應(yīng)同時開發(fā)針對產(chǎn)品免疫激動功能的體外分析方法, 例如: 根據(jù)激動劑種類(TLR/STINC激動劑), 構(gòu)建對應(yīng)分子通路的細胞水平熒光報告基因系統(tǒng)。

3.2 雜質(zhì)研究

交叉載藥雜質(zhì): 在雙載荷ADC的偶聯(lián)反應(yīng)中, 可能形成一些非預(yù)期的交叉雜質(zhì)。此類雜質(zhì)包括交叉偶聯(lián)產(chǎn)物(本應(yīng)連接藥物a的位點誤偶聯(lián)了藥物b或反之導(dǎo)致特定位點的雜合偶聯(lián))、載荷交聯(lián)物(例如: 在分支連接子策略中, 2種藥物未能分別連接在不同分支上, 而是發(fā)生了載荷間交聯(lián)或自偶聯(lián)副反應(yīng))等。交叉載藥雜質(zhì)的產(chǎn)生往往與偶聯(lián)工藝間的原理有部分交叉或與偶聯(lián)副反應(yīng)有關(guān), 如果2種載荷的偶聯(lián)機制不完全正交, 則可能發(fā)生彼此競爭同一位點或互相反應(yīng)的情況。這些雜質(zhì)通常在結(jié)構(gòu)上與預(yù)期載藥形式高度相似, 但功能活性可能不同, 建議通過高靈敏度的分析方法(質(zhì)譜、肽圖等)加以鑒別和量化, 并通過工藝優(yōu)化將其含量控制在可接受范圍內(nèi)。

偶聯(lián)不完全或未偶聯(lián)雜質(zhì): 在雙載荷ADC制備過程中, 可能出現(xiàn)部分抗體分子未偶聯(lián)上2種載荷或其中之一的情況, 導(dǎo)致在最終產(chǎn)品中存在未偶聯(lián)的裸抗體(DAR=0)或只偶聯(lián)了1種藥物的“單載荷ADC”雜質(zhì)。例如: 采用不同位點分別偶聯(lián)載荷a和b的策略中, 如果某批次反應(yīng)中藥物b偶聯(lián)效率波動至較低水平, 則會殘留某些僅帶有藥物a的ADC分子。該類不對稱未偶聯(lián)雜質(zhì)不能發(fā)揮預(yù)期的雙載荷間的協(xié)同或正交活性作用, 因此, 將對整體樣品的有效性造成稀釋作用, 同時由于其偶聯(lián)載荷數(shù)量少、疏水性較低, 可能表現(xiàn)出與主要載藥形式不同的藥動學(xué)特征。建議在載藥特性的表征中對該類雜質(zhì)予以關(guān)注, 結(jié)合工藝穩(wěn)健性并基于風險合理擬定該類雜質(zhì)的控制策略, 如分別報告2種載荷的DAR0含量。

除上述雜質(zhì)外, 雙載荷ADC還面臨與單載荷ADC相似的雜質(zhì)和變異體問題。例如: 由于高疏水性載藥導(dǎo)致的聚集體增加, 偶聯(lián)過程可能引入小分子副產(chǎn)物、偶聯(lián)方法特異性雜質(zhì)(如糖偶聯(lián)工藝中可能引入的糖鏈修剪、酶轉(zhuǎn)移鏈接、點擊反應(yīng)等步驟反應(yīng)不完全所產(chǎn)生的雜質(zhì))、電荷異構(gòu)體變化等。另外, 工藝相關(guān)雜質(zhì)的種類或殘留水平也可能因多種偶聯(lián)方法而增加, 建議研發(fā)者規(guī)范開展各類工藝相關(guān)雜質(zhì)殘留的安全因子范圍分析, 如涉及暫無毒理學(xué)數(shù)據(jù)的雜質(zhì)(自制酶等), 應(yīng)根據(jù)非臨床批次殘留量并結(jié)合分析方法和工藝的變異度綜合擬定其控制限度并納入質(zhì)量標準。總體而言, 雙載荷ADC雜質(zhì)的復(fù)雜性主要來源于該類產(chǎn)品生產(chǎn)中多種偶聯(lián)方法的使用以及兩載荷間復(fù)雜的載藥分布組合。建議根據(jù)產(chǎn)品結(jié)構(gòu)和所用偶聯(lián)工藝的特點, 結(jié)合高靈敏度且正交的分析方法, 充分評估并表征雙載荷ADC的雜質(zhì), 為有效制定質(zhì)量控制策略提供基礎(chǔ)。

3.3 質(zhì)量標準

檢驗項目方面, 除ADC常規(guī)檢項外, 建議將與2種載荷有關(guān)的質(zhì)量屬性分別納入質(zhì)量標準中進行控制。例如: DAR值(DAR-a和DAR-b)、載藥分布(各a+b構(gòu)型比例)、未偶聯(lián)抗體(未偶聯(lián)載荷a/b含量)、游離小分子含量(載荷a/b及有關(guān)物質(zhì)含量)等。此外, 應(yīng)根據(jù)雜質(zhì)研究結(jié)果, 評估非預(yù)期偶聯(lián)雜質(zhì)、偶聯(lián)工藝特異性雜質(zhì)等對產(chǎn)品臨床安全性和有效性的影響, 必要時納入質(zhì)量標準。標準限度的擬定策略和依據(jù)與單載荷ADC基本一致。

4

穩(wěn)定性研究

相較于單載荷ADC(只需要監(jiān)控1種藥物的脫落), 雙載荷ADC需要同時關(guān)注2種不同藥物的潛在脫落。2種載荷的連接子可能對儲存條件(如溫度、光照強度、pH等)的敏感性不同, 進而在穩(wěn)定性研究中出現(xiàn)選擇性脫落其中1種載荷的趨勢, 從而逐漸改變產(chǎn)品內(nèi)載藥組合比例, 同時釋放游離的小分子藥物。因此, 在雙載荷ADC產(chǎn)品開發(fā)和臨床試驗過程中, 應(yīng)在穩(wěn)定性研究中對2種載荷的脫落情況分別進行監(jiān)測, 根據(jù)游離小分子的波動趨勢, 合理優(yōu)化產(chǎn)品處方和儲存條件, 確保效期內(nèi)整體載藥分布和游離小分子水平的波動處于可接受范圍內(nèi)。

5

總結(jié)與展望

隨著載荷/連接子種類的不斷豐富和偶聯(lián)技術(shù)的持續(xù)發(fā)展, 雙載荷ADC作為一種新興的分子設(shè)計策略, 展現(xiàn)出多靶點聯(lián)合打擊、協(xié)同增強療效及克服腫瘤異質(zhì)性和耐藥性的潛在優(yōu)勢, 已成為下一代ADC產(chǎn)品的重要發(fā)展方向。然而, 這一設(shè)計所帶來的結(jié)構(gòu)/工藝復(fù)雜性也對藥物的研發(fā)和技術(shù)審評提出了挑戰(zhàn)。本文結(jié)合目前雙載荷ADC的研發(fā)進展, 對該類產(chǎn)品的生產(chǎn)用原材料、生產(chǎn)工藝和質(zhì)量研究等方面的藥學(xué)審評考慮進行闡述, 以期為該類產(chǎn)品的研發(fā)和申報提供參考。隨著偶聯(lián)策略和分析方法的不斷優(yōu)化和改進, 更多雙載荷ADC產(chǎn)品進入申報階段, 對該類產(chǎn)品的理解將逐漸深入, 監(jiān)管機構(gòu)也將繼續(xù)推進指導(dǎo)原則的更新與完善, 雙載荷ADC有望為腫瘤治療帶來新的突破。

參考文獻

詳見《中國新藥雜志》 2025年 第34卷第24期

識別微信二維碼，添加抗體圈小編，符合條件者即可加入抗體圈微信群！

請注明：姓名+研究方向！

本公眾號所有轉(zhuǎn)載文章系出于傳遞更多信息之目的，且明確注明來源和作者，不希望被轉(zhuǎn)載的媒體或個人可與我們聯(lián)系(cbplib@163.com)，我們將立即進行刪除處理。所有文章僅代表作者觀點，不代表本站立場。