前言

肝內(nèi)膽管癌（ICC）是第二常見(jiàn)的肝癌類型，患者預(yù)后較差，5年生存率低于20%，如今，免疫聯(lián)合化療已經(jīng)成為晚期ICC的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。然而，部分患者由于免疫抑制性腫瘤微環(huán)境（TME）的存在，難以從免疫治療中獲益，臨床中亟需進(jìn)一步探索ICC中TME的特征，了解其導(dǎo)致免疫檢查點(diǎn)抑制劑療效不佳的機(jī)制。近期，一項(xiàng)發(fā)表于

Hepatology

研究背景

TME由多種宿主細(xì)胞（如癌細(xì)胞、免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞）以及非細(xì)胞成分（包括分泌物質(zhì)和細(xì)胞外蛋白）組成。這些因素共同在癌癥的發(fā)生、發(fā)展以及對(duì)免疫治療的反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。在TME內(nèi)部，浸潤(rùn)腫瘤的免疫細(xì)胞至關(guān)重要，因?yàn)檫@些細(xì)胞會(huì)與腫瘤細(xì)胞相互作用，導(dǎo)致有利（抗腫瘤）或不利（促腫瘤）的結(jié)果。目前，對(duì)于ICC的TME研究有限，現(xiàn)有研究主要集中關(guān)注特定標(biāo)記物或細(xì)胞類型，如PD-L1表達(dá)和CD8 T細(xì)胞浸潤(rùn)。浸潤(rùn)腫瘤的免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間復(fù)雜的相互關(guān)系尚未被完全闡明，理解這些相互作用對(duì)于開(kāi)發(fā)靶向TME的治療策略至關(guān)重要。本次研究中，研究者利用空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)來(lái)表征ICC中瘤內(nèi)免疫浸潤(rùn)的表型，嘗試探索導(dǎo)致免疫抵抗的因素。

研究方法

研究者從中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院國(guó)家癌癥中心/腫瘤醫(yī)院的預(yù)處理患者中獲取了70個(gè)福爾馬林固定石蠟包埋的ICC樣本和8個(gè)新鮮的ICC樣本進(jìn)行分析。

研究結(jié)果

• ICC中巨噬細(xì)胞+ 型和漿細(xì)胞+ 型瘤內(nèi)免疫浸潤(rùn)模式

研究者評(píng)估了每個(gè)樣本的免疫評(píng)分，以代表免疫浸潤(rùn)的平均水平，并研究了4個(gè)具有顯著免疫浸潤(rùn)的樣本中瘤內(nèi)免疫簇的具體細(xì)胞組成，其中有2個(gè)樣本（p3和p5）顯示出較高的巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD68表達(dá)，在p4和p6中則顯示出漿細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物（IGHA1、IGHG1、IGHG3以及多聚IgA和IgM的連接鏈）的高表達(dá)。根據(jù)這些模式，研究者將樣本分為巨噬細(xì)胞+ 型和漿細(xì)胞+ 型。

為了驗(yàn)證浸潤(rùn)巨噬細(xì)胞特征的生物學(xué)和預(yù)后意義，研究者使用ConsensusClusterPlus包對(duì)FU-iCCA隊(duì)列進(jìn)行了共識(shí)聚類。聚類確定了患者中的兩個(gè)不同亞群，對(duì)比簇2（C2），簇1（C1）顯示出浸潤(rùn)巨噬細(xì)胞特征基因的更高表達(dá)，C1患者對(duì)比C2患者的生存結(jié)局更差，顯示了浸潤(rùn)巨噬細(xì)胞特征的預(yù)后價(jià)。C1還在與增殖（細(xì)胞周期和DNA復(fù)制）以及促腫瘤特征相關(guān)的通路中富集，包括TGFB信號(hào)傳導(dǎo)、VEGF信號(hào)傳導(dǎo)和細(xì)胞外基質(zhì)重塑的激活，相反，C2則表現(xiàn)出以白細(xì)胞遷移和炎癥反應(yīng)相關(guān)通路為標(biāo)志的強(qiáng)大免疫反應(yīng)。這些發(fā)現(xiàn)支持了MARCO+ 巨噬細(xì)胞的促腫瘤作用。MARCO在巨噬細(xì)胞+ 型樣本中高表達(dá)，并且MARCO水平高的ICC患者總生存期更短，表明其在臨床結(jié)局中具有不利作用。

研究者進(jìn)一步探索了MARCO在ICC中的表型，通過(guò)使用大規(guī)模單細(xì)胞數(shù)據(jù)集（GSE125449、GSE138709、GSE151530、GSE181878和測(cè)序的8個(gè)ICC樣本）識(shí)別出6個(gè)主要細(xì)胞群：上皮細(xì)胞、髓系細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞，髓系細(xì)胞占總細(xì)胞群體的7.3%，其中15.8%為MARCO+ TAMs。MARCO在TAM中的分布驗(yàn)證了其作為典型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物的作用。SPP1、RETN和FBP1在MARCO+ TAM中高表達(dá)，它們可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖并抑制免疫反應(yīng)。S100A9和S100A8（Ca2?結(jié)合蛋白）也在MARCO+ TAM中上調(diào)。

通路分析顯示，MARCO+ TAM中上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）活性增強(qiáng)，涉及細(xì)胞外基質(zhì)重塑并促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。在MARCO+ TAM中觀察到血管生成和缺氧增強(qiáng)。免疫抑制通路TGFB信號(hào)傳導(dǎo)在MARCO+ TAM中也同樣增強(qiáng)，免疫相關(guān)通路則在MARCO+ TAM中被抑制。

• MARCO+ TAMs對(duì)ICC中的TME具有免疫抑制作用

研究者根據(jù)整合的單細(xì)胞RNA測(cè)序數(shù)據(jù)集中MARCO+ TAMs中位數(shù)量將樣本分為高M(jìn)ARCO+ TAM組和低MARCO+ TAM組，高M(jìn)ARCO+ TAM組顯示出更高比例的惡性細(xì)胞和髓系細(xì)胞，而T細(xì)胞和B細(xì)胞較少。在ICC樣本上使用MARCO、CD3和CD8進(jìn)行多重免疫熒光顯示，MARCO高表達(dá)區(qū)域的CD3和CD8表達(dá)較少，提示其對(duì)T細(xì)胞和CD8 T細(xì)胞的免疫抑制效應(yīng)。

研究者整理了與T細(xì)胞活性相關(guān)的基因，高M(jìn)ARCO+ TAM樣本顯示出更高的記憶T細(xì)胞標(biāo)記物（如SELL和CCR7）表達(dá)，以及免疫檢查點(diǎn)PDCD1、CTLA4和TIGIT的表達(dá)增加。相反，低MARCO+ TAM樣本顯示出更高的細(xì)胞因子（如IFNG）和細(xì)胞毒性標(biāo)記物（如GZMB）表達(dá)。

• 探索ICC TME的潛在治療靶點(diǎn)

研究者探索了具有不同瘤內(nèi)免疫浸潤(rùn)模式的樣本的腫瘤細(xì)胞表型，以探索潛在的腫瘤-免疫相互作用。在大規(guī)模單細(xì)胞數(shù)據(jù)集中提取了腫瘤細(xì)胞相對(duì)于免疫細(xì)胞和正常上皮細(xì)胞具有獨(dú)特性的標(biāo)記基因，標(biāo)準(zhǔn)為avg_log2FC>0.25且p值<0.05，結(jié)果識(shí)別出在巨噬細(xì)胞+腫瘤區(qū)域表達(dá)最高的CTSE。驗(yàn)證結(jié)果顯示，與鄰近正常區(qū)域相比，CTSE主要在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，在70名ICC患者中進(jìn)行的IHC證實(shí)了腫瘤細(xì)胞中CTSE表達(dá)升高，且晚期ICC患者對(duì)比早期患者的CTSE水平更高。

研究者檢查了CTSE在三種免疫浸潤(rùn)類型樣本中的空間表達(dá)模式，發(fā)現(xiàn)在巨噬細(xì)胞+型樣本（p3和p5）中，CTSE在腫瘤區(qū)域內(nèi)顯示出顯著表達(dá)，該結(jié)果在患者隊(duì)列中得到驗(yàn)證，CTSE水平高的患者總生存期更短。同時(shí)具有高CTSE和高M(jìn)ARCO水平的患者臨床結(jié)局最差，表明這兩種細(xì)胞類型之間存在潛在的協(xié)同作用。

研究結(jié)果與討論

這項(xiàng)研究對(duì)ICC中的瘤內(nèi)免疫浸潤(rùn)及其空間排列進(jìn)行了全面的分析，劃分了巨噬細(xì)胞+ 和漿細(xì)胞+ 兩個(gè)類型，其中MARCO+ TAMs是巨噬細(xì)胞+型樣本中的主要細(xì)胞類型，并與CTSE+ 腫瘤細(xì)胞密切相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)可以指導(dǎo)未來(lái)的臨床試驗(yàn)，并為治療策略的開(kāi)發(fā)提供潛在的生物標(biāo)志物。

研究中還分析了MARCO+ TAM腫瘤具有侵襲性特征的機(jī)制，CTSE作為一種來(lái)自肽酶A1家族的天冬氨酸蛋白酶，在腫瘤區(qū)域與MARCO+ TAMs共同大量表達(dá)，可以作為潛在的治療靶點(diǎn)。

這項(xiàng)研究存在局限性，例如缺乏接受免疫治療的患者，研究者計(jì)劃通過(guò)構(gòu)建具有MARCO表達(dá)調(diào)控的小鼠模型和使用生成CTSE+ 腫瘤細(xì)胞的ICC小鼠細(xì)胞系來(lái)驗(yàn)證本次發(fā)現(xiàn)。總之，這項(xiàng)研究揭示了ICC中瘤內(nèi)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)模式，并詳盡闡明了MARCO+ TAM和CTSE+ 腫瘤細(xì)胞的共定位誘導(dǎo)了免疫抑制性TME。

參考文獻(xiàn)：[1] Fan G, Tao C, Li L, Xie T, Tang L, Han X, Shi Y. The co-location of MARCO+ tumor-associated macrophages and CTSE+ tumor cells determined the poor prognosis in intrahepatic cholangiocarcinoma. Hepatology. 2025 Jul 1;82(1):25-41.

審批編號(hào)：CN-174484

有效期至：2026/12/10

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