【寫(xiě)在前面】：本期推薦的是由福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院、福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院、福建省老年綜合醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室等研究團(tuán)隊(duì)合作近期發(fā)表于JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY(IF5.4）的一篇文章，揭示清解扶正顆粒通過(guò)調(diào)節(jié)TLR4和IL-4R介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞極化抑制結(jié)腸炎相關(guān)性結(jié)直腸癌的機(jī)制。

【期刊簡(jiǎn)介】

【題目及作者信息】

Mechanism of Qingjie Fuzheng Granules in inhibiting colitis associated colorectal cancer by regulating TLR4 and IL-4R mediated macrophage polarization

民族藥理學(xué)相關(guān)性

清解扶正顆粒（QFG）是一種中草藥配方，已被用作結(jié)腸炎性相關(guān)結(jié)直腸癌（CAC）的輔助治療，但其作用機(jī)制尚不清楚。

研究目的

本研究旨在探討QFG抗CAC的潛在機(jī)制是否與巨噬細(xì)胞極化有關(guān)。

材料與方法

非靶向代謝組學(xué)和分子對(duì)接評(píng)估了QFG的潛在化合物與巨噬細(xì)胞極化相關(guān)靶點(diǎn)的相互作用。建立AOM/DSS誘導(dǎo)的CAC小鼠模型，利用流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)染色分析QFG對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響。體外實(shí)驗(yàn)涉及由不同QFG濃度或MD2敲除誘導(dǎo)的Ana-1巨噬細(xì)胞模型，以分析M1樣表型。同時(shí)，利用IL-4或CT26細(xì)胞培養(yǎng)上清液誘導(dǎo)的M2樣巨噬細(xì)胞模型來(lái)評(píng)估QFG對(duì)M2樣巨噬細(xì)胞的影響。最后，分別使用RT-qPCR和Western blot分析與TLR4途徑相關(guān)的M1樣表型的mRNA表達(dá)和IL-4R介導(dǎo)的途徑中的蛋白質(zhì)表達(dá)。

結(jié)果

分子對(duì)接證實(shí)了QFG成分與IL-4R或TLR4/MD2受體復(fù)合物之間存在結(jié)合位點(diǎn)。QFG可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1樣表型轉(zhuǎn)變，同時(shí)抑制CAC小鼠和Ana-1巨噬細(xì)胞結(jié)腸中的M2樣表型。QFG導(dǎo)致iNOS、IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA表達(dá)上調(diào)，這可以通過(guò)TAK242、SR11302、INH14、PDTC和LY294002或MD2的敲除來(lái)抵消。同時(shí)，QFG抑制了IL-4R誘導(dǎo)的STAT 6和Akt的磷酸化。

結(jié)論

QFG內(nèi)的各種單體成分可以分別與MD2或IL-4R結(jié)合，從而通過(guò)TLR4介導(dǎo)的NF-κB、MAPK和PI3K/Akt通路激活誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1樣表型轉(zhuǎn)變，或通過(guò)IL-4R介導(dǎo)的JAKs通路抑制抑制巨噬細(xì)胞向M2樣表型轉(zhuǎn)變。最終對(duì)CAC的發(fā)生和發(fā)展產(chǎn)生抑制作用。

圖文摘要

【前言】

最近的研究表明，CAC的發(fā)作和進(jìn)展與TME內(nèi)M1/M2巨噬細(xì)胞的極化之間存在顯著關(guān)系。在CAC的初始炎癥階段，巨噬細(xì)胞主要表現(xiàn)出以M1樣促炎特性為特征的表型，導(dǎo)致炎癥損傷，而較低的M2樣巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出抗炎作用，通過(guò)減少腸道炎癥來(lái)阻礙腫瘤進(jìn)展。相比之下，在CAC的中晚期，促瘤M2樣TAM占主導(dǎo)地位并支持腫瘤生長(zhǎng)，而腫瘤部位存在M1樣促炎巨噬細(xì)胞與更有利的預(yù)后有關(guān)。巨噬細(xì)胞極化的調(diào)節(jié)可以作為抑制結(jié)腸炎發(fā)展為結(jié)直腸癌癌癥的關(guān)鍵策略，從而降低發(fā)展CAC的風(fēng)險(xiǎn)。

清解扶正顆粒 (QFG)是由白花蛇舌草、半枝蓮、大麥和黃芪組成的臨床方劑。根據(jù)中醫(yī)學(xué)原理，QFG被認(rèn)為具有清熱解毒、健脾益氣等功效。藥理學(xué)研究表明，白花蛇舌草含有環(huán)醚類(lèi)、黃酮類(lèi)、黃酮苷類(lèi)、蒽醌類(lèi)、酚酸類(lèi)及其衍生物，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿、抗腫瘤等藥理活性。具體而言，關(guān)于其抗腫瘤特性，研究表明其在抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤血管生成和凋亡以及調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)方面具有療效。黃芪含有多種生物活性化合物，如多糖、三萜苷、黃酮和皂苷。其中，黃芪多糖已顯示出抗腫瘤特性，并被認(rèn)為是安全的，使其在癌癥免疫治療領(lǐng)域越來(lái)越重要。具體而言，黃芪多糖可以通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、啟動(dòng)癌癥細(xì)胞自噬和改變腫瘤微環(huán)境來(lái)阻止癌癥轉(zhuǎn)移。當(dāng)與補(bǔ)充治療方式結(jié)合時(shí)，黃芪多糖有可能增強(qiáng)治療效果，同時(shí)減輕不良反應(yīng)和毒性。半枝蓮含有熊果酸、新氯烷二萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、多糖、類(lèi)固醇和揮發(fā)油，這有助于其具有多種生物活性，如抗菌、抗腫瘤、抗炎和抗白血病特性。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)半枝蓮D.Don的提取物通過(guò)抑制三陰性乳腺癌癥細(xì)胞中的RhoA/ROCK1信號(hào)傳導(dǎo)來(lái)調(diào)節(jié)EZrin介導(dǎo)的過(guò)程，包括增殖、遷移、侵襲和凋亡。大麥主要含有saponarin，這是一種具有多種藥理作用的化合物，包括抗氧化和抗炎特性，以及在預(yù)防肝病、降低血糖和抗肥胖方面的潛在益處。此外，大麥?zhǔn)铅?葡聚糖和阿拉伯木聚糖的豐富來(lái)源，它們具有各種免疫調(diào)節(jié)活性，可以作為有前景的免疫抑制劑，影響細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞（LAK）。四種處方藥的協(xié)同作用有助于緩解癌癥和增強(qiáng)免疫功能。先前的臨床研究表明，QFG聯(lián)合化療可以改善晚期癌癥患者的疲勞、腹瀉等不良癥狀，減少化療引起的不良反應(yīng)，改善免疫功能?；狙芯拷Y(jié)果表明，QFG抑制結(jié)直腸癌癌癥細(xì)胞的遷移和侵襲，并可能減輕5-氟尿嘧啶引起的腸粘膜損傷。此外，QFG對(duì)血管生成、淋巴管生成和上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化具有抑制作用，同時(shí)也促進(jìn)了結(jié)直腸癌的細(xì)胞凋亡和自噬。然而，其潛在的抗腫瘤機(jī)制尚不清楚。

本研究利用偶氮甲烷（AOM）/硫酸葡聚糖鈉（DSS）誘導(dǎo)的CAC小鼠模型，研究QFG對(duì)CAC小鼠整體健康和腸粘膜巨噬細(xì)胞極化的影響。進(jìn)行Ana-1巨噬細(xì)胞的體外培養(yǎng)，以評(píng)估QFG引起的M1樣或M2樣表型的表達(dá)以及涉及TLR4和IL-4R途徑的潛在機(jī)制。本研究旨在闡明QFG通過(guò)巨噬細(xì)胞極化抑制CAC進(jìn)展的機(jī)制，從而為其臨床應(yīng)用提供理論支持。

【結(jié)果部分】

1.QFG中化合物的LC-MS/MS分析和與巨噬細(xì)胞極化相關(guān)的潛在成分的分子對(duì)接分析。

2.QFG對(duì)CAC小鼠整體健康和腫瘤形成的影響。

3.QFG對(duì)CAC小鼠腸道巨噬細(xì)胞極化的影響。

4.QFG促進(jìn)Ana-1巨噬細(xì)胞在體外向M1樣表型轉(zhuǎn)變。

5.QFG在體外抑制CT26細(xì)胞誘導(dǎo)的Ana-1巨噬細(xì)胞向M2樣表型分化的IL-4或培養(yǎng)上清液。

6.QFG的機(jī)制通過(guò)TLR4途徑促進(jìn)Ana-1巨噬細(xì)胞向M1樣表型發(fā)展。

7.QFG對(duì)MD2敲除Ana-1細(xì)胞巨噬細(xì)胞極化的影響。

8.QFG拮抗IL-4介導(dǎo)的STAT6和Akt磷酸化。

9.QFG調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化的潛在機(jī)制。

【結(jié)論與討論】

QFG中存在的單體成分具有與MD2或IL-4R結(jié)合的能力，通過(guò)TLR4介導(dǎo)的NF-κB、MAPK和PI3K/Akt途徑，導(dǎo)致巨噬細(xì)胞向M1樣表型激活，或通過(guò)IL-4R介導(dǎo)的JAKs途徑抑制巨噬細(xì)胞向M2樣表型抑制（圖9）。這最終導(dǎo)致抑制結(jié)直腸癌癌癥的發(fā)生和發(fā)展。這些發(fā)現(xiàn)為QFG在治療CAC中的潛在治療應(yīng)用提供了有價(jià)值的見(jiàn)解。然而，過(guò)多的巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)镸1樣表型可能會(huì)對(duì)腸道組織造成炎癥損傷，最終加劇CAC的嚴(yán)重程度。因此，精確調(diào)節(jié)QFG的劑量對(duì)于防止巨噬細(xì)胞過(guò)度激活為M1樣表型至關(guān)重要。解決這個(gè)問(wèn)題有可能為開(kāi)發(fā)有效的藥物療法奠定堅(jiān)實(shí)的科學(xué)基礎(chǔ)。

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