撰文 | 沈楊課題組

卵巢癌是一種侵襲性極強(qiáng)的婦科惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)發(fā)病率較高。它是導(dǎo)致女性癌癥相關(guān)死亡的第五大原因，且在所有婦科腫瘤中的死亡率位居首位。盡管治療手段不斷進(jìn)步，但卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案仍為手術(shù)聯(lián)合化療，該方案預(yù)后效果不佳，且復(fù)發(fā)率較高。近年來(lái)，腫瘤免疫療法逐漸成為一種革命性治療手段，與手術(shù)、放療、化療并稱(chēng)為腫瘤治療的 “ 四大支柱 ” 。

在免疫療法中，嵌合抗原受體 T 細(xì)胞（ CAR-T ）療法在血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療中取得了顯著成效，已有多款 CAR-T 產(chǎn)品獲批臨床應(yīng)用。然而，由于實(shí)體瘤治療中療效欠佳，還存在脫靶風(fēng)險(xiǎn)。

間皮素（ MSLN ）是一種分子量為 71kDa 的糖基磷脂酰肌醇錨定細(xì)胞表面蛋白，在腫瘤選擇性高表達(dá)的特性，是免疫治療的理想靶點(diǎn)。 B7H3 （ CD276 ）作為 B7 配體家族的免疫檢查點(diǎn)分子，在多種腫瘤中異常高表達(dá)，且與不良臨床結(jié)局、腫瘤侵襲性及免疫逃逸密切相關(guān)。目前，針對(duì) MSLN 或 B7H3 的臨床前及臨床研究已取得令人鼓舞的成果，多項(xiàng)臨床試驗(yàn)正在評(píng)估其治療晚期實(shí)體瘤的療效。

近日，由 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院沈楊教授 、 東南大學(xué)生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院肖忠黨教授 領(lǐng)導(dǎo)的研究團(tuán)隊(duì)在 Oncogene 上發(fā)表了題為 Dual-target CAR-T therapy for ovarian cancer: synergistic targeting of MSLN and B7H3 enhances anti-tumor efficacy and overcomes antigen heterogeneity 的研究論文。 為克服 CAR-T 治療實(shí)體瘤的脫靶風(fēng)險(xiǎn)，研究團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)了一種雙靶點(diǎn)CAR-T細(xì)胞系統(tǒng)，且前期蛋白質(zhì)組學(xué)測(cè)序研究已證實(shí)該系統(tǒng)具有良好的安全性。該系統(tǒng)整合兩種不同的信號(hào)通路：靶向間皮素的單鏈抗體負(fù)責(zé)傳遞 CD3ζ 激活信號(hào)，而靶向 B7H3 的單鏈抗體則提供 4-1BB 共刺激信號(hào)。這種雙信號(hào)結(jié)構(gòu)確保 CAR-T 細(xì)胞僅在靶細(xì)胞同時(shí)表達(dá)間皮素和 B7H3 時(shí)才被完全激活。相反，僅表達(dá)其中一種抗原的正常細(xì)胞，只能單獨(dú)提供激活信號(hào)或共刺激信號(hào)，不足以觸發(fā) T 細(xì)胞的強(qiáng)效活化。該策略不僅降低了脫靶毒性風(fēng)險(xiǎn)，還提高了 CAR-T 細(xì)胞在雙抗原陽(yáng)性腫瘤組織中的殺傷精準(zhǔn)度和療效。通過(guò)充分發(fā)揮間皮素與 B7H3 靶向治療的協(xié)同作用，為實(shí)體瘤 CAR-T 療法的發(fā)展邁出重要一步，為解決抗原異質(zhì)性和靶點(diǎn)相關(guān)脫靶毒性這兩大難題提供新的有效方案 。

為評(píng)估 B4M3 CAR-T 細(xì)胞的體內(nèi)治療效果，研究 人員 利用人卵巢癌細(xì)胞株 OVCAR3 構(gòu)建小鼠異種移植瘤模型，并分別采用空載 CAR-T 細(xì)胞（ Mock CAR-T ）、 B7H3 CAR-T 細(xì)胞、 MSLN CAR-T 細(xì)胞、 BM CAR-T 細(xì)胞及 B4M3 CAR-T 細(xì)胞對(duì)荷瘤小鼠進(jìn)行干預(yù)。結(jié)果顯示，與各對(duì)照組相比， B4M3 CAR-T 細(xì)胞可顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，且未導(dǎo)致小鼠體重出現(xiàn)明顯變化，提示該細(xì)胞的全身毒性極低。

在細(xì)胞輸注后第 3 天和第 6 天對(duì)小鼠外周血進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)， B4M3 CAR-T 細(xì)胞治療組小鼠體內(nèi)的 CD3 + 細(xì)胞占比隨時(shí)間推移逐漸升高，并于第 6 天達(dá)到峰值。這種顯著的細(xì)胞擴(kuò)增能力，證實(shí)了 B4M3 CAR-T 細(xì)胞具備強(qiáng)大的體內(nèi)增殖潛能。同時(shí)， B4M3 CAR-T 細(xì)胞治療組小鼠的生存期顯著延長(zhǎng)。

為進(jìn)一步明確 B4M3 CAR-T 細(xì)胞的表型特征，本研究采用 CD45RO 和 CD62L 分子標(biāo)記技術(shù)分析其細(xì)胞亞群構(gòu)成。結(jié)果表明， B4M3 CAR-T 細(xì)胞治療組的效應(yīng) T 細(xì)胞（ TEFF ，占比 21.37% ）、效應(yīng)記憶 T 細(xì)胞（ TEM ，占比 25.11% ）以及中樞記憶 T 細(xì)胞（ TCM ，占比 17.41% ）比例均為所有組別中最高。其中，中樞記憶 T 細(xì)胞的高占比提示 B4M3 CAR-T 細(xì)胞富集了具有長(zhǎng)期存續(xù)能力和強(qiáng)效抗腫瘤活性的細(xì)胞亞群。

值得注意的是，與輸注后第 3 天相比，第 6 天 B4M3 CAR-T 細(xì)胞在外周血單個(gè)核細(xì)胞中的占比進(jìn)一步升高，而其他所有 CAR-T 細(xì)胞治療組的細(xì)胞占比均呈下降趨勢(shì)。這一現(xiàn)象提示，在殺傷腫瘤細(xì)胞的過(guò)程中， B4M3 CAR-T 細(xì)胞的增殖速率高于耗竭速率，從而能夠在體內(nèi)維持較高的細(xì)胞數(shù)量，反映出該細(xì)胞具有更強(qiáng)的存續(xù)能力和抗腫瘤活性。

腫瘤組織的免疫熒光染色結(jié)果顯示， CD3+ CAR-T 細(xì)胞在腫瘤內(nèi)出現(xiàn)明顯浸潤(rùn)，其中 B4M3 CAR-T 細(xì)胞的腫瘤歸巢能力最強(qiáng)。尤為重要的是，對(duì) B4M3 CAR-T 細(xì)胞治療組小鼠的重要臟器進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析后，未發(fā)現(xiàn)任何脫靶毒性的跡象，證實(shí)了該治療方案的安全性。

研究證實(shí) B4M3 CAR-T 細(xì)胞在體內(nèi)外均具有強(qiáng)效的腫瘤殺傷活性，且兼具特異性增強(qiáng)、細(xì)胞耗竭減少及脫靶效應(yīng)極低的優(yōu)勢(shì)。該雙靶點(diǎn)設(shè)計(jì)確保 CAR-T 細(xì)胞僅在靶細(xì)胞共表達(dá)兩種腫瘤抗原時(shí)被激活，為卵巢癌的治療提供了一種極具前景的新策略。未來(lái)研究需進(jìn)一步優(yōu)化 B4M3 CAR-T 細(xì)胞的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)與遞送方式，以提升其臨床應(yīng)用的有效性與安全性。

為闡明不同 CAR-T 細(xì)胞療法治療后卵巢癌的空間免疫圖譜特征，研究 人員 采用 組織 成像質(zhì)譜流式技術(shù)（ IMC ），對(duì) 治療 過(guò)程中的 腫瘤 離體組織進(jìn)行 分析。研究團(tuán)隊(duì)優(yōu)化了一套包含 39 種抗體的檢測(cè)組合，以此識(shí)別腫瘤基質(zhì)細(xì)胞、固有免疫細(xì)胞及適應(yīng)性免疫細(xì)胞群，并明確其功能狀態(tài)。

研究共分析了 1,489,100 個(gè)細(xì)胞，基于標(biāo)志性譜系分子，采用監(jiān)督式譜系歸屬法將細(xì)胞劃分為 6 類(lèi)不同的免疫細(xì)胞群，分別為髓系細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞（ MSCs ）、樹(shù)突狀細(xì)胞（ DCs ）、 CD4 ? T 細(xì)胞、 CD8 ? T 細(xì)胞及調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞（ Tregs ）。

研究結(jié)果顯示 ，經(jīng) B4M3 CAR-T 細(xì)胞治療的腫瘤組織中， CD8 ? T 細(xì)胞（占比 30.5% ）與 CD4 ? T 細(xì)胞（占比 25.6% ）的富集程度最高，同時(shí)調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞占比（ 10% ）低于其他治療組。這一免疫表型提示，腫瘤微環(huán)境中存在大量 T 細(xì)胞浸潤(rùn)，適應(yīng)性免疫應(yīng)答得以增強(qiáng)，且細(xì)胞毒性活性顯著。

綜上所述， 這項(xiàng)研究借助成像質(zhì)譜流式技術(shù)解析不同 CAR-T 療法干預(yù)后卵巢癌的空間免疫圖譜，通過(guò) 39 重抗體組合分析逾 148 萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，劃分出 6 類(lèi)免疫細(xì)胞群。結(jié)果顯示， B4M3 CAR-T 細(xì)胞治療組的腫瘤組織中 CD4 ? 、 CD8 ? T 細(xì)胞占比最高，調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞占比最低，提示該療法可有效重塑腫瘤免疫微環(huán)境，促進(jìn)效應(yīng) T 細(xì)胞浸潤(rùn)、增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答，同時(shí)抑制免疫抑制性細(xì)胞群體。該研究從空間免疫層面闡明了 B4M3 CAR-T 細(xì)胞的治療機(jī)制，證實(shí)其具有誘導(dǎo)長(zhǎng)效抗腫瘤免疫的潛力。

本研究由 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院 沈楊 課題組 和 東南大學(xué) 生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院 肖忠黨 課題組 共同完成。 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院 紀(jì)鋒 博士 、 丁波 副主任醫(yī)師 、 東南大學(xué) 生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院 博士 研究 生 嚴(yán)凱 為本文的共同第一作者， 沈楊 教授與 肖忠黨教授 為本文的共同通訊作者。 東南大學(xué)附屬中 大 醫(yī)院生物樣本庫(kù)、生邁醫(yī)（南京）生物科技有限公司提供的基礎(chǔ)設(shè)施的支持 。

原文鏈接： https://www.nature.com/articles/s41388-025-03663-y

制版人：十一

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