丙型肝炎病毒（HCV）已感染全球約1.3億至1.5億人（約占世界人口的2%-3%），每年導(dǎo)致約70萬(wàn)人死亡，是引發(fā)肝硬化、肝細(xì)胞癌等危及生命的肝病的主要誘因。該病毒的感染率在全球呈現(xiàn)顯著差異，埃及的 HCV 感染率最高，約有10%的人口感染該病毒。

目前尚無(wú)針對(duì) HCV 的特效疫苗?，F(xiàn)有治療方案包括聚乙二醇干擾素（PEG IFN）、利巴韋林、波司普韋、替拉普韋和索非布韋（商品名：索非布韋）。PEG IFN 能激活細(xì)胞抗病毒反應(yīng)，但約50%的患者在停藥后會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)。利巴韋林的作用機(jī)制尚不明確，但可能通過(guò)直接抑制RNA依賴性RNA聚合酶（RdRp）或改變病毒復(fù)制所需的核苷酸池來(lái)發(fā)揮作用。

多項(xiàng)研究表明，PEG IFN 與利巴韋林的聯(lián)合用藥比單獨(dú)使用任一藥物更有效。波司普韋和替拉普韋均為新型蛋白酶抑制劑，專門針對(duì)基因1型病毒的NS3-4a蛋白酶，可單獨(dú)使用或與干擾素聯(lián)用。索非布韋作為核苷酸類似物，常與利巴韋林聯(lián)合用于基因2型和3型患者，與PEG IFN 聯(lián)合用于基因1型和4型患者。索非布韋通過(guò)抑制RNA聚合酶（NS5B抑制劑）發(fā)揮作用，該酶是肝炎病毒復(fù)制RNA的核心工具。

目前針對(duì) HCV 的合成抗病毒療法存在諸多副作用，且部分藥物如索非布韋價(jià)格高昂。因此，探索無(wú)毒、經(jīng)濟(jì)且具有抗 HCV 作用的天然產(chǎn)物應(yīng)用顯得尤為重要。大和米蕈（MGN-3/Biobran）是一種改良型米糠提取物，含有多糖成分 β1 和4-木糖基半纖維素。其主要化學(xué)結(jié)構(gòu)為阿拉伯木聚糖，主鏈為木糖，側(cè)鏈為阿拉伯糖聚合物。

該物質(zhì)是一種強(qiáng)效生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑（BRM），已知能增強(qiáng) NK 細(xì)胞活性、激活樹突狀細(xì)胞（DCs）、調(diào)節(jié)干擾素生成并提升人體吞噬細(xì)胞的胞內(nèi)殺菌能力?，F(xiàn)有研究表明，大和米蕈（MGN-3/Biobran）在抵御多種惡性腫瘤方面具有潛力，包括對(duì)抗埃利希癌相關(guān)氧化應(yīng)激、13 γ 輻射及HIV活性。

本研究探討了大和米蕈（MGN-3/Biobran）對(duì) HCV 的抗病毒作用?？蒲腥藛T初步研究了大和米蕈（MGN-3/Biobran）抑制慢性 HCV 患者病毒血癥的能力，同時(shí)評(píng)估了其對(duì)肝酶和炎癥的影響，并考察了相關(guān)副作用。

研究對(duì)象和方法

1、大和米蕈（MGN-3/Biobran）

大和米蕈（MGN-3/Biobran）是一種變性半纖維素，通過(guò)將米糠半纖維素與香菇的多種碳水化合物水解酶反應(yīng)獲得。它是一種含有 ? -1,3-葡聚糖和活化半纖維素的多糖，由日本東京大和制藥株式會(huì)社提供。

2、患者入選/排除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)為：

（1）年齡范圍為18至65歲，男女均可。

（2）肝活檢證實(shí) HCV 后慢性活動(dòng)性肝炎的證據(jù)。

（3）愿意參與研究并簽署書面知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)為：

（1）肝組織病理學(xué)檢查顯示F0和F4的患者。

（2）存在自身免疫性肝炎。

（3）孕婦和哺乳期婦女。

（4）有明顯門脈高壓和全血細(xì)胞減少。

（5）存在主要心理創(chuàng)傷。

（6）存在其他感染，如 HBV 和HIV。

（7）接受其他抗病毒治療的患者。

（8）無(wú)法提供書面同意。

3、研究設(shè)計(jì)

在隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)中，科研人員選取了37名確診為基因型4 HCV 的患者，這些患者均收治于埃及開羅的卡斯?fàn)枴ぐ枴ぐ後t(yī)院。

本研究已獲得埃及開羅大學(xué)醫(yī)院及美國(guó)加利福尼亞州洛杉磯查爾斯·R·德魯醫(yī)科大學(xué)（CDU）機(jī)構(gòu)審查委員會(huì)（IRB）的批準(zhǔn)。研究方案嚴(yán)格遵循1975年《赫爾辛基宣言》的倫理準(zhǔn)則，相關(guān)批準(zhǔn)文件已由埃及開羅大學(xué)醫(yī)院、卡斯?fàn)枴ぐ枴ぐ後t(yī)院以及美國(guó)CDU的IRB共同簽署。

4、患者

本研究共納入37例 HCV（基因型4）患者（男性23例，女性14例，年齡15-69歲）。所有受試者均簽署知情同意書。

患者被隨機(jī)分為兩組：大和米蕈（MGN-3/Biobran）組（干預(yù)組，n=16）和聚乙二醇 IFN 聯(lián)合利巴韋林對(duì)照組（n=21）。實(shí)驗(yàn)前，科研人員對(duì)兩組患者的臨床特征進(jìn)行了詳細(xì)評(píng)估（見表1）。

具體檢測(cè)指標(biāo)包括：丙肝病毒載量、甲胎蛋白（AFP）水平、白細(xì)胞總數(shù)（TLC）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、血紅蛋白（Hb）水平、膽固醇水平、甘油三酯（TG）水平、糖化血紅蛋白（HbA1c）水平、肌酐水平、白蛋白水平、膽紅素水平、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值（INR）凝血功能指標(biāo)以及隨機(jī)血糖（RBG）水平。

表1. PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林（對(duì)照組）與大和米蕈（MGN-3/Biobran）干預(yù)的 HCV 患者臨床特征對(duì)比。

5、淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定方案

采集新鮮外周血樣本后，使用Celltac α -6400系列血液分析儀（日本醫(yī)療）進(jìn)行EDTA抗凝處理，并檢測(cè)總白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)。通過(guò)利什曼染色血涂片進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。將全血樣本與抗人CD16- FITC 和抗人CD56-PE單克隆抗體試劑在4℃條件下孵育，隨后分離紅細(xì)胞與有核細(xì)胞，并通過(guò)自動(dòng)化設(shè)備測(cè)定細(xì)胞回收率。

在細(xì)胞計(jì)數(shù)方面，使用貝克曼庫(kù)爾特epics XL流式細(xì)胞儀檢測(cè)樣本，以確定淋巴細(xì)胞亞群，包括CD16+CD56–、CD16–CD56+和CD16+CD56+細(xì)胞。

6、流程

對(duì)照組患者（平均年齡40±11歲，14男7女）每周接受180 μg 聚乙二醇化聚肌胞苷酸（Pegasys-Roche）皮下注射治療，持續(xù)三個(gè)月。同時(shí)根據(jù)體重調(diào)整利巴韋林劑量（體重超過(guò)75公斤者服用1200毫克，低于75公斤者服用1000毫克）。大和米蕈（MGN-3/Biobran）組（平均年齡45±12歲，9男7女）則每日口服分裝的1克生物腦制劑，隨餐服用，整個(gè)研究周期持續(xù)三個(gè)月。

在治療前及治療后三個(gè)月，研究人員分別檢測(cè)了病毒載量、毒性指標(biāo)、肝酶水平、干擾素- γ（IFN - γ）水平以及淋巴細(xì)胞亞群比例。病毒載量檢測(cè)采用羅氏公司生產(chǎn)的 COBAS ? TaqMan?分析儀進(jìn)行定量PCR檢測(cè)， IFN - γ 、甲胎蛋白（AFP）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平則通過(guò)美國(guó)加州加登納市光譜化學(xué)制造公司提供的專用ELISA試劑盒進(jìn)行分析。

毒性評(píng)估綜合運(yùn)用了問(wèn)卷調(diào)查、臨床觀察及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果。僅在大和米蕈（MGN-3/Biobran）組中對(duì)淋巴細(xì)胞亞群和 IFN - γ 進(jìn)行了基線和治療后三個(gè)月的檢測(cè)。

7、統(tǒng)計(jì)分析

本研究采用描述性統(tǒng)計(jì)方法對(duì)研究人群進(jìn)行特征描述。分類變量以頻數(shù)和百分比呈現(xiàn)，連續(xù)變量則以均值和標(biāo)準(zhǔn)差表示。

為檢驗(yàn)大和米蕈（MGN-3/Biobran）（干預(yù)組）與對(duì)照組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，科研人員分別采用卡方檢驗(yàn)（分類變量）、t檢驗(yàn)（正態(tài)分布連續(xù)變量）和Mann-Whitney U檢驗(yàn)（非正態(tài)分布連續(xù)變量）。對(duì)于正態(tài)分布的連續(xù)變量，采用配對(duì)t檢驗(yàn)比較基線值與治療后三個(gè)月的數(shù)值差異；非正態(tài)分布變量則采用非參數(shù)中位數(shù)檢驗(yàn)——Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)。

為評(píng)估基線病毒載量、治療后三個(gè)月病毒載量及病毒載量下降幅度在大和米蕈（MGN-3/Biobran）（干預(yù)組）與對(duì)照組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，科研人員采用非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)分析使用 SPSS 22和 STATA 14軟件完成， P 值 <0.05被視為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1、HCV 患者的臨床特征

表1總結(jié)了對(duì)照組和大和米蕈（MGN-3/Biobran）組患者的測(cè)量特征范圍。在14個(gè)變量中，大和米蕈（MGN-3/Biobran）組與對(duì)照組（PEG IFN 加利巴韋）在基線水平上存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異：TG、HbA1c和肌酐（P <0.05）。在所有其他基線變量中，兩組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異（P >0.05）。

2、病毒血癥水平

主要觀察指標(biāo)是患者干預(yù)后的病毒血癥水平。大和米蕈（MGN-3/Biobran）和PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林的病毒學(xué)療效數(shù)據(jù)詳見表2。

PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，接受大和米蕈（MGN-3/Biobran）干預(yù)的患者病毒載量較基線值顯著降低（病毒載量中位數(shù)：干預(yù)前中位數(shù)224,500，干預(yù)后三個(gè)月中位數(shù)70,150，中位數(shù)差值-35,200； P =0.023）。

接受PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林治療的患者病毒載量較基線值同樣顯著降低（病毒載量中位數(shù)：治療前中位數(shù)300,000，治療后三個(gè)月中位數(shù)16，中位數(shù)差值-153,984； P =0.001）。在21例PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林治療組患者中，有11例（52.4%）病毒載量極低或無(wú)法測(cè)定（即病毒載量水平為16）。

兩組患者病毒載量較基線值均顯著降低（P <0.05），基線時(shí)兩組病毒載量中位數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P =0.175），治療3個(gè)月后兩組病毒載量中位數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P =0.377），病毒載量較基線值的中位數(shù)降低無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P =0.235）。

表2. 兩組基線和3個(gè)月時(shí)的病毒載量和肝酶水平。

3、肝酶

表2展示了肝酶（ALT和AST）的研究結(jié)果。與基線值相比，大和米蕈（MGN-3/Biobran）干預(yù)三個(gè)月后ALT水平升高21.3%，AST水平升高11.0%，但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性（P >0.05）。相比之下，PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林治療組患者治療三個(gè)月后兩種酶水平均下降，但僅ALT具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性（P =0.007）。

4、干擾素- γ 水平

對(duì)大和米蕈（MGN-3/Biobran）組的基線和三個(gè)月時(shí)的 IFN - γ 水平進(jìn)行了檢測(cè)。圖1的結(jié)果顯示了16名患者中 IFN - γ 的水平。

圖1. 大和米蕈（MGN-3/Biobran）干預(yù)前后患者 IFN - γ 水平變化（n=16）。

結(jié)果顯示：9/16名患者（56.3%）出現(xiàn) 2–4.2-fold 升高，5/16名患者（31.3%）出現(xiàn)輕微升高，2/16名患者（12.5%）未見升高?？傮w而言，基線時(shí) IFN - γ 的平均值為16.1±1.7 pg/mL，三個(gè)月后升至34.4±19.8 pg/mL，較基線值增加了兩倍（P <0.001）。

5、淋巴細(xì)胞亞群

對(duì)大和米蕈（MGN-3/Biobran）組的淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行基線和3個(gè)月的檢查。表3的結(jié)果顯示，與基線值相比，CD16+CD56-、CD16-CD56+和CD16+CD56+在3個(gè)月時(shí)沒(méi)有顯著變化（P >0.05）。

表3. 大和米蕈（MGN-3/Biobran）組基線和3個(gè)月時(shí)的淋巴細(xì)胞亞群。

6、毒性

通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查、醫(yī)生觀察及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，評(píng)估了大和米蕈（MGN-3/Biobran）與PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林的毒性反應(yīng)。

接受PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林治療的患者出現(xiàn)易疲勞、發(fā)熱、消化不良、體重下降、干咳、肝腫大、貧血、血小板減少、頭痛及全身酸痛等癥狀。

相比之下，使用大和米蕈（MGN-3/Biobran）干預(yù)的患者未出現(xiàn)任何副作用。報(bào)告健康狀況良好。表4顯示了兩組患者報(bào)告的癥狀更多細(xì)節(jié)。

表4. PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林或Biobran治療 HCV 患者的臨床結(jié)果。

本研究關(guān)于大和米蕈（MGN-3/Biobran）抗 HCV 活性的動(dòng)機(jī)源于先前研究顯示的其抗病毒活性。例如，大和米蕈（MGN-3/Biobran）通過(guò)抑制HIV-1復(fù)制在健康受試者外周血單核細(xì)胞（PBMCs）中表現(xiàn)出抗HIV活性，這些受試者感染了HIV-1 SF株。大和米蕈（MGN-3/Biobran）在艾滋病患者及 PBMC 感染的健康受試者中均抑制了合胞體形成。

此外，大和米蕈（MGN-3/Biobran）已被證明可預(yù)防老年人的普通感冒癥狀，其咳嗽、不適、發(fā)熱、咽喉痛和鼻分泌物/打噴嚏等普通感冒綜合征評(píng)分（中國(guó)化學(xué)會(huì)）顯著降低。服用大和米蕈（MGN-3/Biobran）的老年人總評(píng)分比未服用者低約三倍。這些結(jié)果促使科研人員進(jìn)一步探索大和米蕈（MGN-3/Biobran）對(duì)慢性 HCV 患者限制病毒血癥的潛在作用。

本文結(jié)果顯示，與基線病毒載量相比，接受大和米蕈（MGN-3/Biobran）干預(yù)的患者在治療3個(gè)月后病毒載量顯著降低。大和米蕈（MGN-3/Biobran）組的病毒載量降低幅度與接受標(biāo)準(zhǔn)PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林治療的對(duì)照組相似（P >0.05）。

此外，接受PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林治療的患者治療后肝酶均下降，這與Hui等人早期研究結(jié)果一致，該研究發(fā)現(xiàn)治療后3個(gè)月ALT水平下降。Levent等人的研究表明，這種下降似乎還會(huì)持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間。另一方面，接受大和米蕈（MGN-3/Biobran）干預(yù)的患者這兩種酶的水平變化不顯著。

關(guān)于大和米蕈（MGN-3/Biobran）抑制 HCV 的具體作用機(jī)制仍有待深入研究。 HCV 通過(guò)與清道夫受體B1型結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞，其表達(dá)水平會(huì)因脂多糖而下調(diào)。由于大和米蕈（MGN-3/Biobran）屬于多糖類物質(zhì)，可能與其他從真菌和細(xì)菌中提取的多糖類似，其抑制 HCV 復(fù)制的機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào) HCV 受體實(shí)現(xiàn)的。另一種可能是大和米蕈（MGN-3/Biobran）通過(guò)增強(qiáng)宿主細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答來(lái)發(fā)揮治療性疫苗的作用，從而幫助降低病毒載量。

本研究中觀察到大多數(shù)接受大和米蕈（MGN-3/Biobran）干預(yù)的患者 IFN - γ 水平升高，這一發(fā)現(xiàn)部分支持了后一種觀點(diǎn)。已有研究表明， IFN - γ 是抑制病毒復(fù)制的強(qiáng)效抑制劑。此外，研究還證實(shí)，大和米蕈（MGN-3/Biobran）能調(diào)節(jié)如CD4+和CD8+T細(xì)胞以及 NK 細(xì)胞等不同免疫細(xì)胞，無(wú)論是在體外還是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中。這些免疫細(xì)胞在抗病毒感染（包括 HCV）中發(fā)揮著重要作用，這已是學(xué)界公認(rèn)的共識(shí)。

值得注意的是，大和米蕈（MGN-3/Biobran）組未出現(xiàn)任何副作用，患者健康狀況良好；而PEG IFN 聯(lián)合利巴韋林組則出現(xiàn)發(fā)熱、貧血、血小板減少等不良反應(yīng)，患者還報(bào)告了易疲勞癥狀。

結(jié)論

總的來(lái)說(shuō)，大和米蕈（MGN-3/Biobran）是一種潛在的新型輔助方案，對(duì)慢性 HCV 的干預(yù)成本低、安全、有效。需要進(jìn)一步的研究來(lái)確定其在大量 HCV 感染者中的療效以及更長(zhǎng)時(shí)間的療效。

免責(zé)聲明：大和米蕈LENTIN Plus 1000LY作為一款免疫調(diào)節(jié)劑，屬于保健食品，不能代替藥物治療疾病，大家應(yīng)理性對(duì)待。