Western Blot（WB）作為生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)研究中驗證蛋白表達(dá)的核心實驗，其數(shù)據(jù)嚴(yán)謹(jǐn)性很重要。

2026 年以來，頂刊對 WB 實驗的要求迎來全面收緊：從內(nèi)參蛋白驗證到原始圖像提交，一系列新規(guī)成為投稿硬性門檻，不少課題組因未及時適配，遭遇論文返修、發(fā)表延期甚至畢業(yè)受阻，最近隔壁實驗室的師兄，就在 WB 上吃了虧。

哎，我們組一師兄投《Nature Communications》 的稿，因沒驗證 GAPDH 穩(wěn)定性，被要求全重做 WB 數(shù)據(jù)了。

這也太影響進(jìn)度了，畢業(yè)怕是都要受牽連吧？

可不是嘛，而且這不是個例，是 NC 2026 WB 新規(guī)的硬性要求。

聽說這標(biāo)準(zhǔn)還推廣到整個 Nature 子刊矩陣了，以后頂刊投稿這關(guān)必過啊。

長期以來，科研人員習(xí)慣性選用GAPDH、β-actin 作為內(nèi)參蛋白，卻極少驗證其在藥物處理、細(xì)胞脅迫、組織特異性等特定實驗條件下的表達(dá)穩(wěn)定性，這種「想當(dāng)然」的操作模式，使得 WB 數(shù)據(jù)的可重復(fù)性與準(zhǔn)確性大打折扣。

《Nature Communications》Western blot 要求

多刊同步收緊

內(nèi)參穩(wěn)定性成硬性指標(biāo)

值得關(guān)注的是，收緊 WB 投稿規(guī)范的并非只有《Nature Communications》，《JBC》、《Drug Metabolism and Disposition》、《Acta Pharmacologica Sinica》、《British Journal of Pharmacology》、《JBMR Plus》等多本權(quán)威期刊均已同步更新要求，明確將內(nèi)參蛋白表達(dá)穩(wěn)定性驗證列為硬性指標(biāo)。

內(nèi)參蛋白若未經(jīng)驗證存在表達(dá)不穩(wěn)定的情況，直接作為 WB 實驗歸一化對照會造成定量結(jié)果出現(xiàn)偏差，使得失去準(zhǔn)確性與科學(xué)性，還會在投稿時被期刊審稿人質(zhì)疑數(shù)據(jù)嚴(yán)謹(jǐn)性與可重復(fù)性，輕則被要求補(bǔ)充驗證實驗、重做全部 WB 數(shù)據(jù)，造成課題進(jìn)度滯后、論文發(fā)表延期，重則直接被拒稿。

各大期刊 WB 內(nèi)參要求匯總表

內(nèi)參不穩(wěn)定？

可以考慮替代方案-總蛋白染色

針對傳統(tǒng)管家蛋白（如 β-actin、GAPDH）在特定實驗條件下易出現(xiàn)表達(dá)波動、難以滿足定量歸一化可靠性要求的問題，各期刊均明確提出了更為穩(wěn)健的替代策略 ——總蛋白染色。相較于易受細(xì)胞狀態(tài)、處理因素影響的單一內(nèi)參蛋白，總蛋白染色可直接反映每泳道上樣的總蛋白量，能更全面、客觀地校正上樣與轉(zhuǎn)印差異。

《JBC》Western blot 要求截圖

《Drug Metabolism and Disposition》Western blot 要求截圖

（部分期刊推薦使用總蛋白染色）

總蛋白染色包括：Stain-Free（免染）、麗春紅 S、固綠、考馬斯亮藍(lán)等，其中 Stain-Free 是當(dāng)前較為主流、期刊認(rèn)可度高的總蛋白內(nèi)參方法。

Stain-Free 總蛋白染色是一種基于三氯化合物熒光標(biāo)記的 WB 內(nèi)參歸一化技術(shù)，通過在電泳后對膜上全部蛋白進(jìn)行熒光染色，實現(xiàn)對總蛋白上樣量的精準(zhǔn)定量，替代傳統(tǒng)內(nèi)參蛋白（如 GAPDH/ACTIN），避免實驗處理對內(nèi)參蛋白表達(dá)的干擾，同時具備線性范圍寬、靈敏度高、可全程可視化的優(yōu)勢。

無需驗證內(nèi)參穩(wěn)定性，直接滿足期刊歸一化要求；

與常規(guī) WB 流程兼容，同膜完成總蛋白成像與目標(biāo)蛋白檢測；

定量更準(zhǔn)確、線性范圍更寬，數(shù)據(jù)更易通過審稿。

現(xiàn)在識別下方二維碼，即可申請Stain-Free 免費試用以及全套免染 Western 實驗流程，精準(zhǔn)定量總蛋白上樣量、替代傳統(tǒng)內(nèi)參蛋白，規(guī)避內(nèi)參表達(dá)干擾：

更多全領(lǐng)域通用 WB 要求

未裁剪原圖必須提交

除內(nèi)參規(guī)范外，幾乎所有生物、醫(yī)學(xué)類頂刊已形成統(tǒng)一要求：投稿時必須提交未裁剪（uncropped）的 WB 原始膜圖作為補(bǔ)充數(shù)據(jù)，嚴(yán)禁對圖像進(jìn)行隨意裁切、拼接或過度修飾。這一要求旨在保障實驗數(shù)據(jù)的可追溯性與可重復(fù)性，是當(dāng)前頂刊審稿的核心核查點。

實驗室需建立完善的數(shù)據(jù)留存機(jī)制，妥善保管原始圖像、成像參數(shù)及完整實驗記錄，部分代表性出版集團(tuán)與期刊的具體要求如下：

綜上，面對近年來全面更新的 WB 投稿新規(guī)，科研人唯有及時調(diào)整實驗操作規(guī)范，才能有效規(guī)避投稿風(fēng)險。無論是做好內(nèi)參蛋白的穩(wěn)定性驗證，還是選用 Stain-Free 總蛋白染色技術(shù)作為替代方案，亦或是嚴(yán)格留存未裁剪的原始實驗圖像，都是適配新規(guī)的關(guān)鍵舉措。

為幫助科研人解決原圖處理、數(shù)據(jù)存檔、投稿規(guī)范適配等實際問題，伯樂生命科學(xué)特開通專家免費咨詢通道，為科研人員提供一對一的專業(yè)指導(dǎo)，助力大家順利通過審稿，讓研究成果更快、更順利地發(fā)表。

注：

1. 相關(guān)產(chǎn)品僅限科研使用，不作為臨床診斷。

2. Bio-Rad為Bio-Rad Laboratories, Inc.在特定區(qū)域的商標(biāo)。本文所使用的所有商標(biāo)均歸其各自所有者所有。? 2026 Bio-Rad Laboratories, Inc.

3. 本活動的最終解釋權(quán)歸伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司。

內(nèi)容策劃：沈佳鈺

內(nèi)容審核：周育紅

題圖來源：圖蟲創(chuàng)意