非洲豬瘟（ASF）是由非洲豬瘟病毒（ASFV）引起的烈性傳染病，致死率可高達(dá)100%，對全球養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成嚴(yán)重威脅。ASFV是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的巨型DNA病毒，其二十面體衣殼主要由p72蛋白構(gòu)成，這種蛋白約占病毒顆?？傎|(zhì)量的三分之一，在病毒組裝過程中扮演著核心角色。盡管p72蛋白如此重要，但它在宿主細(xì)胞內(nèi)如何被精確調(diào)控、如何穩(wěn)定存在以完成病毒組裝，一直是未解之謎。解析這一機制，對于開發(fā)新型抗病毒策略具有重要意義。

2026年3月8日，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所步志高、盛相鵬、趙東明團隊在《自然·通訊》發(fā)表了題為《親環(huán)蛋白A穩(wěn)定衣殼蛋白p72促進非洲豬瘟病毒復(fù)制》的研究論文。該研究首次揭示了宿主蛋白親環(huán)蛋白A（CypA）是p72的關(guān)鍵結(jié)合伴侶，通過抑制p72的泛素化降解來穩(wěn)定該蛋白，從而促進病毒復(fù)制。

研究團隊首先通過免疫沉淀聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)，在感染ASFV的豬肺泡巨噬細(xì)胞中鑒定出一個與p72結(jié)合的宿主因子——親環(huán)蛋白A。通過序列比對和亞細(xì)胞定位分析，研究人員確認(rèn)CypA與p72在細(xì)胞質(zhì)中存在共定位，具備相互作用的時空基礎(chǔ)。進一步的體外和體內(nèi)結(jié)合實驗證實，CypA能夠直接與p72形成復(fù)合物，為后續(xù)的功能研究奠定了基礎(chǔ)。

為了揭示CypA與p72的結(jié)合模式，研究團隊利用AlphaFold3進行結(jié)構(gòu)預(yù)測，發(fā)現(xiàn)CypA通過其疏水腔與p72三聚體頂部的暴露區(qū)域（ER1）結(jié)合。通過構(gòu)建系列截短突變體和多位點丙氨酸替換突變體，實驗證實破壞CypA的疏水腔結(jié)構(gòu)會顯著削弱其與p72的結(jié)合能力。同時，靶向p72 ER1區(qū)域的單克隆抗體能夠有效競爭性阻斷CypA的結(jié)合，進一步驗證了這一結(jié)合界面。

研究發(fā)現(xiàn)p72主要通過泛素-蛋白酶體途徑降解。CypA過表達(dá)能顯著延長p72的半衰期，減少其泛素化修飾，特別是K63連接的多聚泛素化水平。相反，敲除CypA則加速p72降解。值得注意的是，CypA并不像病毒自身編碼的pB602L那樣促進p72三聚體形成，提示其作用機制更傾向于維持p72穩(wěn)定性，而非參與蛋白質(zhì)折疊。

研究進一步發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典的CypA抑制劑環(huán)孢素A及其非免疫抑制衍生物NIM811、Alisporivir，能夠占據(jù)CypA的疏水腔，有效阻斷其與p72的結(jié)合。在細(xì)胞水平上，這些抑制劑處理導(dǎo)致p72泛素化水平升高、蛋白穩(wěn)定性下降、半衰期縮短。這一發(fā)現(xiàn)為靶向CypA抑制ASFV復(fù)制提供了藥理學(xué)依據(jù)。

在細(xì)胞和原代巨噬細(xì)胞水平上，無論是通過CRISPR/Cas9敲除CypA基因，還是通過siRNA干擾CypA表達(dá)，均顯著抑制ASFV復(fù)制。同樣，使用CypA抑制劑處理感染細(xì)胞，病毒蛋白表達(dá)水平和子代病毒產(chǎn)量均呈劑量依賴性下降，流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡觀察也證實感染細(xì)胞比例大幅降低。這些結(jié)果確立了CypA在ASFV感染中的關(guān)鍵作用。

機制解析表明，CypA并不影響病毒的吸附、內(nèi)化以及早期基因轉(zhuǎn)錄，而是主要調(diào)控p72蛋白的積累。在CypA抑制條件下，p72蛋白水平顯著下降，導(dǎo)致病毒工廠形成受阻、病毒粒子組裝異常。透射電鏡觀察顯示，抑制劑處理組細(xì)胞內(nèi)的成熟病毒顆粒明顯減少，并出現(xiàn)異常的管狀結(jié)構(gòu)，這與p72功能缺陷時的表型一致。綜上，該研究揭示了宿主CypA通過穩(wěn)定p72蛋白促進ASFV復(fù)制的全新機制，為開發(fā)抗非洲豬瘟藥物提供了新靶點。

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