當外源性病原體或內(nèi)源性損傷因素刺激機體時，激活機體的固有免疫系統(tǒng)，引起非特異性的防御反應。單核細胞、巨噬細胞等固有免疫細胞受到刺激后，釋放炎癥介質(zhì)，激活炎癥反應。當致炎因素持續(xù)存在時引起組織損傷，導致多種疾病。促炎因子可誘發(fā)大量活性氧（ROS）的生成，進一步引發(fā)細胞的氧化損傷。

榆干離褶傘（

Lyophyllum ulmarium

）又名大榆蘑，屬擔子菌門、離褶傘屬，主要分布在東北、華北等地，具有豐富的營養(yǎng)及藥用價值。榆干離褶傘溶栓酶（LUFE）作為榆干離褶傘的一種活性成分，具有溶栓、抗炎、抗氧化應激等多種生物活性。

基于LUFE的多種功效及巨噬細胞在炎癥反應中的重要作用，延邊大學醫(yī)學院的蘇新、張晴、沈明花*等以脂多糖（LPS）建立巨噬細胞炎癥模型，探究榆干離褶傘溶栓酶對巨噬細胞炎癥反應的作用及相關(guān)機制，旨在為榆干離褶傘的功能活性開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 LUFE對細胞炎性因子水平的影響

炎癥反應發(fā)生時，巨噬細胞合成、釋放一系列炎性因子，如IL-1β、IL-6及MCP-1等。如表1所示，與正常對照組相比，LPS作用后細胞的IL-1β、IL-6及MCP-1水平極顯著升高（

P

＜0.01）；與LPS組相比，LPS＋LUFE-L組與LPS＋LUFE-H組IL-1β、IL-6及MCP-1水平極顯著降低（

P

＜0.01）；與LPS＋LUFE-L組相比，LPS＋LUFE-H組IL-1β水平極顯著降低（

P

＜0.01）。上述結(jié)果表明LUFE可通過降低炎性因子水平，減輕LPS所致的巨噬細胞炎癥反應。

2 LUFE對細胞炎癥通路相關(guān)蛋白表達水平的影響

如圖1所示，與正常對照組相比，LPS組TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB蛋白水平顯著上升（

P

＜0.01或P＜0.05）；與LPS組相比，經(jīng)LUFE干預后極顯著下調(diào)上述蛋白的表達水平或磷酸化水平（

P

＜0.01）；與LPS＋LUFE-L組相比，LPS＋LUFE-H組MyD88、p-NF-κB/NF-κB蛋白表達水平顯著降低（

P

＜0.05或P＜0.01），說明LUFE可能通過調(diào)控TLR4/MyD88/NF-κB信號通路調(diào)控LPS誘導的J774A.1細胞炎癥反應，且存在一定劑量效應關(guān)系。

3 LUFE對J774A.1細胞趨化作用的影響

通過細胞遷移實驗觀察了LUFE對J774A.1細胞趨化作用的影響。以LPS作為巨噬細胞趨化的誘導劑，觀察各組細胞遷移數(shù)量，并計算趨化指數(shù)。結(jié)果表明，與正常對照組相比，LPS刺激后細胞趨化能力明顯增強（

P

＜0.01）；與LPS組相比，LPS＋LUFE-L組與LPS＋LUFE-H組細胞趨化指數(shù)極顯著降低（

P

＜0.01）（圖2），但兩者之間無顯著差異。提示LUFE能夠減弱巨噬細胞趨化作用。

4 LUFE對J774A.1細胞黏附功能的影響

巨噬細胞的黏附是細胞聚集于炎癥部位的重要環(huán)節(jié)。通過細胞與細胞外基質(zhì)黏附實驗觀察了LUFE對J774A.1細胞黏附功能的影響。如圖3所示，與正常對照組相比，LPS組細胞黏附功能明顯增強（

P

＜0.01）；與LPS組相比，LPS＋LUFE-L組與LPS＋LUFE-H組細胞黏附功能極顯著減弱（

P

＜0.01），但兩者之間無顯著差異。表明LUFE可以降低巨噬細胞的黏附功能，抑制巨噬細胞在病變部位的聚集。

5 LUFE對J774A.1細胞吞噬功能的影響

利用中性紅吞噬實驗觀察了巨噬細胞的吞噬能力。結(jié)果表明，與正常對照組相比，LPS組細胞吞噬功能明顯增強（

P

＜0.01）；與LPS組相比，LPS＋LUFE-L組與LPS＋LUFE-H組細胞吞噬功能極顯著減弱（

P

＜0.01）（圖4），但兩者之間無顯著差異。提示LUFE可以降低J774A.1細胞的吞噬水平，抑制LPS誘導的巨噬細胞的活化。

6 LUFE對細胞ROS水平的影響

炎癥過程中可以產(chǎn)生大量的ROS，進而促進炎癥反應，形成惡性循環(huán)。如圖5所示，與正常對照組相比，LPS組細胞ROS水平極顯著升高（

P

＜0.01）；與LPS組相比，LUFE干預后ROS水平極顯著降低（

P

＜0.01），但兩個劑量組間無顯著差異。提示LUFE可以降低細胞ROS水平，抑制氧化應激，緩解炎癥反應的進一步發(fā)展。

7 LUFE對細胞SOD、CAT活性及MDA含量的影響

為了觀察LUFE對LPS刺激后J774A.1細胞氧化應激相關(guān)指標的影響，檢測了細胞SOD、CAT及MDA水平。如表2所示，LPS刺激后明顯降低了細胞SOD、CAT活性，升高MDA含量（

P

＜0.01）；給予不同質(zhì)量濃度LUFE干預后細胞SOD、CAT水平均顯著升高，MDA水平均顯著降低（

P

＜0.01），不同質(zhì)量濃度LUFE對細胞SOD、CAT活性及MDA含量的影響無顯著差異。說明LUFE可提高抗氧化酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化，緩解細胞的氧化應激損傷。

8 LUFE對Nrf2、Keap-1、HO-1及NQO1蛋白表達水平的影響

如圖6所示，與正常對照組相比，LPS組Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2蛋白表達水平顯著降低，Keap-1表達水平顯著升高（

P

＜0.05，

P

＜0.01）；與LPS組相比，LPS＋LUFE各劑量組Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2表達水平明顯升高，Keap-1表達水平顯著降低（

P

＜0.05，

P

＜0.01）；與LPS＋LUFE-L組相比，LPS＋LUFE-H組Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2表達水平顯著升高，Keap-1表達水平極顯著降低（

P

＜0.01）。這表明LUFE可能通過調(diào)控Nrf2信號通路，影響巨噬細胞的抗氧化應激水平，且存在一定劑量效應關(guān)系。

9 ML385作用后LUFE對Nrf2、HO-1及NQO1蛋白表達的影響

為了進一步探究LUFE對J774A.1細胞的影響是否通過Nrf2及其下游相關(guān)蛋白水平所介導，加入Nrf2的抑制劑ML385后觀察了LUFE對Nrf2、HO-1、NQO1表達水平的影響。如圖7所示，與LPS組相比，LPS＋ML385組Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2的表達水平極顯著降低（

P

＜0.01）；與LPS＋ML385組相比，LPS＋LUFE-H＋ML385組細胞Nrf2、HO-1、NQO1及核Nrf2的表達水平極顯著升高（

P

＜0.01）。這證實了LUFE通過調(diào)控Nrf2信號通路發(fā)揮相應作用。

10 ML385作用后LUFE對J774A.1細胞IL-6、TNF-α水平的影響

為探究LUFE是否可以通過調(diào)節(jié)Nrf2的水平影響炎性因子的水平，分析ML385作用后各處理組細胞IL-6、TNF-α水平的變化規(guī)律。如圖8所示，與LPS組相比，LPS＋ML385組細胞IL-6、TNF-α水平極顯著升高（

P

＜0.01）；與LPS＋ML385組相比，LPS＋LUFE-H＋ML385組細胞IL-6、TNF-α水平極顯著降低（

P

＜0.01）。說明LUFE可通過調(diào)控Nrf2抗氧化途徑降低炎性因子水平。

11 ML385作用后LUFE對TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表達水平的影響

為了探究LUFE是否通過調(diào)控Nrf2影響TLR4/MyD88/NF-κB信號通路，利用Nrf2抑制劑ML385處理并觀察TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表達水平變化情況。如圖9所示，與LPS組相比，LPS＋ML385組細胞TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達水平明顯升高（P＜0.01）；與LPS＋ML385組相比，LPS＋LUFE-H＋ML385組細胞TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表達水平明顯下降（P＜0.01）。這說明LUFE可以通過激活Nrf2信號通路影響TLR4、MyD88及NF-κB的表達，抑制炎癥反應。

結(jié)論

本研究基于巨噬細胞的炎癥模型探討LUFE的抗炎作用，結(jié)果表明，LUFE通過下調(diào)TLR4/MyD88/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達，降低炎性因子水平，抑制巨噬細胞的功能，減輕炎癥反應。LUFE還可以上調(diào)Nrf2信號通路相關(guān)蛋白表達，提高抗氧化酶水平，減輕氧化應激損傷，并通過調(diào)節(jié)Nrf2抑制TLR4/NF-κB信號通路發(fā)揮抗炎作用，但LUFE干預后Nrf2與TLR4通路之間的具體作用機制仍有待進一步研究。

本文《基于巨噬細胞炎癥模型探討榆干離褶傘溶栓酶的抗炎作用 》來源于《食品科學》2025年46卷第20期199-207頁，作者：蘇新, 張晴, 王佳怡，沈明花 *。DOI:10.7506/spkx1002-6630-20250520-128 。點擊下方 閱讀原文 即可查看文章相關(guān)信息。

實習編輯：楊瓊；責任編輯：張睿梅。點擊下方閱讀原文即可查看全文。圖片來源于文章原文及攝圖網(wǎng)